棉花（Gossypium hirsutum）是世界上最重要的經(jīng)濟(jì)作物之一,棉纖維作為一種天然纖維,是紡織工業(yè)的主要原料。棉纖維是由棉花胚珠表皮細(xì)胞極性伸長(zhǎng)發(fā)育而來的一種單細(xì)胞結(jié)構(gòu)的表皮毛,是研究植物細(xì)胞極性伸長(zhǎng)和細(xì)胞次生壁合成的理想的生物材料。藍(lán)銅蛋白（Blue Copper-binding Protein,BCP）是一類銅離子結(jié)合蛋白,廣泛參與植物生長(zhǎng)發(fā)育及逆境脅迫應(yīng)答反應(yīng)。在前期工作中我們從棉花中分離得到了一個(gè)纖維優(yōu)勢(shì)表達(dá)基因GhBCP4,對(duì)其在棉纖維發(fā)育中的功能進(jìn)行了研究,結(jié)果如下:1、GhBCP4蛋白亞細(xì)胞定位分析蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示,GhBCP4蛋白N端有信號(hào)肽（SP）,C端有GPI錨定位點(diǎn),銅離子結(jié)合結(jié)構(gòu)域位于兩者之間。為研究該蛋白的細(xì)胞亞定位,我們構(gòu)建了多個(gè)GhBCP4與eGFP融合表達(dá)載體,進(jìn)行棉花轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,將eGFP報(bào)告蛋白放置于GhBCP4的C末端,在棉花陽(yáng)性愈傷組織細(xì)胞中檢測(cè)不到熒光信號(hào);去掉GhBCP4蛋白的SP和GPI位點(diǎn)后,剩余的中間序列與eGFP融合表達(dá),發(fā)現(xiàn)熒光信號(hào)主要集中于棉花細(xì)胞的液泡中;將eGFP序列插入到GhBCP4的銅離子結(jié)合結(jié)構(gòu)域與GP... 

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
一、引言
    1.1 棉纖維研究進(jìn)展
        1.1.1 棉纖維概述
        1.1.2 棉纖維發(fā)育過程
        1.1.3 棉纖維發(fā)育分子機(jī)制
    1.2 植物細(xì)胞壁概述
        1.2.1 纖維素
        1.2.2 半纖維素
        1.2.3 木質(zhì)素
    1.3 藍(lán)銅蛋白研究進(jìn)展
        1.3.1 藍(lán)銅蛋白概述
        1.3.2 植物藍(lán)銅蛋白
    1.4 類受體激酶研究進(jìn)展
        1.4.1 類受體激酶概述
        1.4.2 類受體激酶CrRLKs研究進(jìn)展
    1.5 快速堿化因子研究進(jìn)展
    1.6 立題依據(jù)及研究意義
二、材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料及器材
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌種及載體
        2.1.3 工具酶和化學(xué)試劑、試劑盒
        2.1.4 常用儲(chǔ)液及緩沖液
        2.1.5 常用培養(yǎng)基
        2.1.6 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 轉(zhuǎn)基因棉花材料的培養(yǎng)及材料收取
        2.2.2 棉花基因組DNA的提取及陽(yáng)性苗鑒定
        2.2.3 轉(zhuǎn)基因材料轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
        2.2.4 棉纖維材料收取及RNA提取、消化、逆轉(zhuǎn)錄
        2.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.6 石蠟切片的制備及染色觀察
        2.2.7 轉(zhuǎn)基因棉花纖維的細(xì)胞壁(AIR)提取及結(jié)晶纖維素含量測(cè)定
        2.2.8 載體構(gòu)建
        2.2.9 農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo)的棉花遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.10 酵母感受態(tài)細(xì)胞AH109、Y187的制備及轉(zhuǎn)化
        2.2.11 酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)
        2.2.12 雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)
        2.2.13 重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 GhBCP4蛋白亞細(xì)胞定位分析
        3.1.1 pB1121::GhBCP4::eGFP融合表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.1.2 pBI121::GhBCP4::eGFP融合表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化
        3.1.3 GhBCP4蛋白亞細(xì)胞定位
    3.2 T3、T4代GhBCP4轉(zhuǎn)基因棉花鑒定及棉纖維表型分析
        3.2.1 T3代GhBCP4轉(zhuǎn)基因棉花表達(dá)量檢測(cè)及棉纖維表型分析
        3.2.2 T4代GhBCP4轉(zhuǎn)基因棉花的陽(yáng)性苗鑒定
        3.2.3 T4代GhBCP4轉(zhuǎn)基因棉花的棉纖維表型分析
    3.3 GhBCP4轉(zhuǎn)基因材料轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析
        3.3.1 差異表達(dá)基因篩選
        3.3.2 差異基因GO富集柱狀圖
        3.3.3 GhBCP4轉(zhuǎn)基因株系與野生型相比差異基因的KEGG分析
    3.4 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)驗(yàn)證
    3.5 GhBCP4轉(zhuǎn)基因材料纖維素含量測(cè)定
        3.5.1 GhBCP4轉(zhuǎn)基因材料石蠟切片分析
        3.5.2 GhBCP4轉(zhuǎn)基因材料細(xì)胞壁組分提取及纖維素含量測(cè)定
    3.6 GhBCP4互作蛋白的篩選
        3.6.1 蛋白互作相關(guān)載體的構(gòu)建
        3.6.2 BIFC實(shí)驗(yàn)探究GhBCP4與GhCrRLK蛋白互作
        3.6.3 酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)探究GhBCP4與GhCrRLK蛋白互作
        3.6.4 Pull-Down實(shí)驗(yàn)探究GhBCP4與GhCrRLK蛋白互作
四、討論
    4.1 GhBCP4促進(jìn)棉纖維細(xì)胞伸長(zhǎng)發(fā)育及可能調(diào)控機(jī)制
    4.2 GhBCP4與GhCrRLK協(xié)同調(diào)控棉纖維發(fā)育
    4.3 RALF可能參與GhBCP4棉纖維伸長(zhǎng)發(fā)育
參考文獻(xiàn)
縮寫表
碩士期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3733177