發(fā)布時(shí)間：2023-01-11 21:27

　　作物生產(chǎn)中大量氮肥的使用,在提高產(chǎn)量的同時(shí),對(duì)環(huán)境也造成了巨大污染,如溫室效應(yīng)、平流層臭氧減少、全球氮循環(huán)的變化以及地表水和地下水的硝酸鹽污染。甘蔗（Saccharrum officinarum L.）是重要的糖料和能源作物,廣西是我國甘蔗的種植大省。氮肥是甘蔗生產(chǎn)中最昂貴的投入之一。若能降低甘蔗生產(chǎn)中氮肥的施用量,對(duì)廣西甘蔗生產(chǎn)具有重要意義。已有大量的研究表明在不施用氮肥或減氮的情況下,回接甘蔗內(nèi)生固氮菌能夠促進(jìn)甘蔗的生長,提高甘蔗的產(chǎn)量。本研究對(duì)從廣西主栽品種ROC22根內(nèi)分離得到的菌株XD20進(jìn)行分子鑒定和促生特性分析;并用此菌株回接B8、ROC22、GT40三個(gè)甘蔗品種的組培苗,比較菌株XD20對(duì)三個(gè)不同甘蔗品種生理特性的影響,探討固氮菌促進(jìn)甘蔗生長的生理基礎(chǔ),旨在為甘蔗的減氮增效生產(chǎn)提供參考依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.菌株16SrDNA鑒定和促生特性分析。采用引物27F/1492R對(duì)菌株的16SrDNA的擴(kuò)增,得到一條大小為1500bp左右的條帶,經(jīng)測(cè)序、系統(tǒng)發(fā)育樹分析,該菌株屬于成團(tuán)泛菌（Pantoea agglomerans）;用通用引物PolyF/PolyR,PCR檢測(cè)... 

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮寫表
1 前言
    1.1 氮素對(duì)植物生長發(fā)育的重要性
    1.2 生物固氮
    1.3 甘蔗內(nèi)生菌的分離及鑒定
    1.4 定殖
    1.5 促生作用
    1.6 成團(tuán)泛菌的應(yīng)用前景
    1.7 生物菌肥
        1.7.1 生物菌肥的概念
        1.7.2 國內(nèi)外生物菌肥的研究現(xiàn)狀
        1.7.3 生物菌肥的作用
        1.7.4 生物菌肥推廣面臨的問題
    1.8 本研究的目的及意義
2 材料和方法
    2.1 甘蔗內(nèi)生菌XD20的鑒定
        2.1.1 培養(yǎng)基
        2.1.2 菌株的活化及培養(yǎng)
        2.1.3 菌株固氮酶活性的測(cè)定
        2.1.4 菌株溶解磷酸鈣特性檢測(cè)
        2.1.5 菌株產(chǎn)嗜鐵素測(cè)定
        2.1.6 菌株分泌IAA定量檢測(cè)
        2.1.7 菌株抗生素抗性檢測(cè)
        2.1.8 細(xì)菌DNA的提取
        2.1.9 16S rDNA基因序列的擴(kuò)增與系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.1.10 固氮酶基因nifH的擴(kuò)增
    2.2 培養(yǎng)條件對(duì)菌株生長特性的影響
        2.2.1 固氮菌株生長曲線
        2.2.2 不同溫度對(duì)菌株生長的影響
        2.2.3 不同pH對(duì)菌株生長的影響
        2.2.4 不同滲透壓對(duì)菌株生長的影響
        2.2.5 不同蔗糖濃度對(duì)菌株生長的影響
        2.2.6 不同氮源對(duì)菌株生長的影響
    2.3 GFP標(biāo)記菌株及nifH基因的表達(dá)檢測(cè)
        2.3.1 材料
        2.3.2 向Pantoea agglomerans XD20菌株導(dǎo)入質(zhì)粒pPROBE- pTetr-TT(抗Sm~(100))
        2.3.3 突變菌株XD20-gfp的檢測(cè)
        2.3.4 甘蔗組培苗的培養(yǎng)
        2.3.5 XD20-gfp突變菌懸液的制備及接種
        2.3.6 樣品的采集與nifH基因相對(duì)表達(dá)量分析
    2.4 成團(tuán)泛菌XD20對(duì)甘蔗的促生效應(yīng)
        2.4.1 甘蔗組培苗的培養(yǎng)
        2.4.2 菌懸液的制備及接種
        2.4.3 接種處理對(duì)甘蔗株高和葉綠素的影響
        2.4.4 接種處理對(duì)甘蔗氮代謝相關(guān)的影響
        2.4.5 接種處理對(duì)甘蔗可溶性糖含量的影響
        2.4.6 接種處理對(duì)甘蔗可溶性蛋白含量的影響
        2.4.7 接種處理對(duì)甘蔗內(nèi)源激素的影響
        2.4.8 接種處理對(duì)甘蔗生物量的影響
        2.4.9 甘蔗GS基因的相對(duì)表達(dá)量
        2.4.10 數(shù)據(jù)計(jì)算與分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 甘蔗內(nèi)生菌XD20的鑒定
        3.1.1 菌株的固氮酶活性
        3.1.2 菌株的促生特性
        3.1.3 菌株XD20 DNA的提取
        3.1.4 16S rDNA基因序列及系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹分析
        3.1.5 固氮酶基因nifH擴(kuò)增結(jié)果
    3.2 培養(yǎng)條件對(duì)菌株生長特性的影響
        3.2.1 菌株的生長曲線
        3.2.2 溫度對(duì)菌株生長的影響
        3.2.3 pH對(duì)菌株生長的影響
        3.2.4 滲透壓對(duì)菌株生長的影響
        3.2.5 不同蔗糖濃度對(duì)菌株生長的影響
        3.2.6 不同氮源對(duì)菌株生長的影響
    3.3 GFP標(biāo)記菌株及nifH基因的表達(dá)檢測(cè)
        3.3.1 XD20的菌落觀察
        3.3.2 突變菌株XD20-gfp的檢測(cè)
        3.3.3 XD20在甘蔗根和地上組織的定殖
        3.3.4 固氮菌XD20 nifH在甘蔗地上組織內(nèi)的表達(dá)
    3.4 成團(tuán)泛菌XD20對(duì)甘蔗的促生效應(yīng)
        3.4.1 接種處理對(duì)甘蔗株高和葉綠素的影響
        3.4.2 接種處理對(duì)甘蔗相關(guān)氮代謝的影響
        3.4.3 接種處理對(duì)可溶性糖含量的影響
        3.4.4 接種處理對(duì)可溶性蛋白的影響
        3.4.5 接種處理對(duì)甘蔗內(nèi)源激素的影響
        3.4.6 接種處理對(duì)甘蔗生物量的影響
        3.4.7 接種固氮菌XD20對(duì)甘蔗葉片GS基因表達(dá)量的影響
4 討論
    4.1 甘蔗內(nèi)生菌XD20的鑒定
    4.2 培養(yǎng)條件對(duì)菌株生長特性的影響
    4.3 GFP標(biāo)記菌株及nifH基因的表達(dá)檢測(cè)
    4.4 成團(tuán)泛菌XD20對(duì)甘蔗的促生效應(yīng)
5 結(jié)論
    5.1 全文總結(jié)
    5.2 論文創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 問題與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]菌株Serratia sp.PW7不同定殖方式對(duì)黑麥草中芘污染去除及其內(nèi)生菌群的影響[J]. 李爽,左尚武,王萬清,王金嵩,權(quán)成偉,朱雪竹.  農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào). 2018(12)
[2]水分處理對(duì)榆樹幼苗不同器官非結(jié)構(gòu)性碳水化合物的影響[J]. 王凱,趙成姣,林婷婷,于國慶,孫菊.  干旱區(qū)研究. 2019(01)
[3]一株高效甘蔗內(nèi)生固氮菌NN08200的鑒定及其對(duì)甘蔗的促生長作用[J]. 史國英,曾泉,農(nóng)澤梅,葉雪蓮,岑貞陸,李楊瑞,胡春錦.  微生物學(xué)通報(bào). 2019(06)
[4]生物菌肥對(duì)甘薯產(chǎn)量、品質(zhì)及經(jīng)濟(jì)效益的影響[J]. 賈崢嶸,李江輝,武宗信,解紅娥,郝佳麗,王凌云,解曉紅,吳宇浩,王萌,高磊,賈琛.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(09)
[5]水稻根際固氮菌分離及最適培養(yǎng)條件研究[J]. 葛江麗,施漢鈺,劉桂棋,劉芳,曹昊.  東北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(04)
[6]叢枝菌根真菌對(duì)福鼎大白茶生長、側(cè)根數(shù)和根系內(nèi)源激素的影響[J]. 夏庭君,吳強(qiáng)盛,邵雅東,江昌俊.  廣西植物. 2018(12)
[7]生物菌肥在大棚青椒栽培中應(yīng)用效果研究[J]. 李艾蘭,周廣俊,宋利云,馬德芳.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè). 2018(08)
[8]固氮細(xì)菌DX120E的gfp標(biāo)記及對(duì)不同甘蔗品種的接種效應(yīng)[J]. 顧彩彩,王震,王露蓉,毛蓮英,宋奇琦,楊麗濤,邢永秀,李楊瑞.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2018(06)
[9]鹽脅迫下泛菌屬內(nèi)生細(xì)菌對(duì)雜交狼尾草發(fā)芽及生理的影響[J]. 傅蕾,李霞,高璐,蔣建雄,孫建中.  草業(yè)科學(xué). 2017(10)
[10]高效溶磷菌的篩選及其促生效應(yīng)研究[J]. 喬策策,王甜甜,王若斐,劉超,高琦,李榮,沈其榮.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(04)

碩士論文
[1]內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌YTB1407在馬鈴薯上的定殖和增強(qiáng)晚疫病致病性分析[D]. 宋彥宏.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]甘蔗根際假單胞菌的分離鑒定及其對(duì)甘蔗的促生作用[D]. 李海碧.廣西大學(xué) 2017
[3]古丈縣XQ生防菌對(duì)煙草青枯病防治效果和煙株生長發(fā)育影響的研究[D]. 羅俊.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[4]解淀粉芽孢桿菌41B-1、銅綠假單胞菌841P-3對(duì)棉花根圍土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響[D]. 李芮.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3729680