丹參（Sallvia miltiorrhizaBunge.）為我國常用大宗藥材,其有效成分——丹參酮和丹酚酸類化合物具有多種藥理活性,以丹參為君藥的“復方丹參滴丸”在治療心腦血管疾病方面已取得顯著療效。近年來,丹參活性成分生物合成途徑分子機制已獲得深入解析,但其生物合成的調控機制研究尚十分匱乏。AP2/ERF轉錄因子在多種藥用植物中具有調控活性成分（如倍半萜青蒿素、二萜紫杉醇等）生物合成的功能,而在丹參中調控活性成分合成的AP2/ERF尚未報道。本次研究的主要研究結果如下:1.本課題組已獲得丹參基因組圖譜,注釋到170個AP2/ERF轉錄因子,命名為Sm001-Sm170。本研究基于已有丹參不同器官（根、莖、葉、花）及根不同組織（周皮、韌皮部、木質部）的轉錄組數據,參照已鑒定參與丹參酮及丹酚酸類化合物生物合成關鍵酶基因的表達譜,篩選出兩個AP2/ERF轉錄因子,皮＜韌皮部和木質部的規(guī)律;Sm082具有在根中顯著性高豐度表達的特點。通過實時熒光定量PCR實驗驗證這兩個AP2/ERF基因的表達譜,結果與轉錄組數據一致。構建瞬時轉化體系,侵染煙草葉片,分析Sm008和Sm082的亞細胞定位情... 

【文章頁數】：92 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 前言
    1. 丹參及其有效成分研究進展
        1.1 丹參的研究概述
        1.2 丹參的組學研究
        1.3 丹參活性成分合成途徑解析
        1.4 丹參中活性成分合成的調控
    2. AP2轉錄因子研究概況
        2.1 AP2/ERF轉錄因子亞家族分類
        2.2 AP2/ERF轉錄因子功能研究
        2.3 AP2/ERF轉錄因子研究方法
    3. 立題依據及研究目的
    4. 研究基礎與論文設計
第二章 材料與方法
    1 材料、試劑與儀器
        1.1 實驗材料
        1.2 試劑
        1.3 主要儀器
    2 實驗方法
        2.1 候選AP2/ERF基因的表達譜分析
        2.2 候選AP2/ERF基因克隆與序列分析
        2.3 AP2/ERF轉錄因子Sm008與Sm082定位于細胞核
        2.4 構建丹參RNAi/過表達重組質粒及丹參的遺傳轉化
        2.5 qRT-PCR鑒定基因的抑制/過表達效果
        2.6 毛狀根及培養(yǎng)液化學成分檢測
        2.7 qRT-PCR檢測參與丹參酮及丹酚酸合成基因表達量變化
        2.8 丹參酮類化合物生物合成基因啟動子區(qū)GCC box預測
        2.9 克隆含GCC box的基因啟動子區(qū)
        2.10 Sm008/082蛋白的原核表達
第三章 結果與分析
    1 驗證AP2/ERF對丹參活性成分生物合成的調控作用
        1.1 候選基因的篩選與表達分析
        1.2 候選基因的克隆及結構分析
        1.3 AP2/ERF轉錄因子Sm008與Sm082定位于細胞核
        1.4 構建丹參的遺傳轉化體系
        1.5 轉基因株系中基因的抑制/過表達效率
        1.6 轉基因株系中丹參酮及丹酚酸類化合物含量變化
    2 探索AP2/ERF調控丹參活性成分生物合成的分子機制
        2.1 轉基因株系中參與丹參酮及丹酚酸生物合成關鍵酶基因表達量變化
        2.2 參與丹參酮及丹酚酸生物合成關鍵酶基因啟動子區(qū)GCC box預測
        2.3 含GCC box的基因啟動子區(qū)的克隆
        2.4 Sm008/082蛋白的原核表達
    3 轉基因組培苗的獲取與基因表達量分析
        3.1 轉基因組培苗的獲取
        3.2 轉基因組培苗中Sm082基因表達量分析
第四章 結論與討論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Biosynthesis and Regulation of Active Compounds in Medicinal Model Plant Salvia miltiorrhiza[J]. Zhi-chao Xu,Ai-jia Ji,Xin Zhang,Jing-yuan Song,Shi-lin Chen.  Chinese Herbal Medicines. 2016(01)
[2]連作對丹參產量和質量的影響及施肥的作用[J]. 李先恩,張曉陽.  世界中醫(yī)藥. 2015(08)
[3]藥用植物轉錄因子AP2/ERF研究與展望[J]. 季愛加,羅紅梅,徐志超,張鑫,宋經元,陳士林.  科學通報. 2015(14)
[4]丹參藥用模式植物研究探討[J]. 宋經元,羅紅梅,李春芳,孫超,徐江,陳士林.  藥學學報. 2013(07)
[5]擬南芥B3轉錄因子基因超家族[J]. 羅光宇,葉玲飛,陳信波.  生命的化學. 2013(03)
[6]不同品種和生長年限對丹參產量及有效成分積累動態(tài)的影響[J]. 周麗莉,伊偉貞,祁建軍,孫鵬,李先恩.  中國野生植物資源. 2012(05)
[7]Current Progress of Research on Pharmacologic Actions of Salvianolic Acid B[J]. 曹煒,郭小文,鄭虎占,李德平,賈冠博,王階.  Chinese Journal of Integrative Medicine. 2012(04)
[8]Generation and analysis of expressed sequence tags from the medicinal plant Salvia miltiorrhiza[J]. SPENCER David F.  Science China（Life Sciences）. 2010(02)
[9]丹參中水溶性成分體外抗氧化活性研究[J]. 夏鑫華,劉梅,張志敏,武志娟,潘素瀅.  中華中醫(yī)藥學刊. 2009(05)
[10]植物基因在轉錄水平上的調控及其生物學意義[J]. 張椿雨,龍艷,馮吉,孟金陵.  遺傳. 2007(07)

博士論文
[1]丹參的葉綠體和線粒體基因組研究[D]. 錢俊.北京協和醫(yī)學院 2014
[2]麥冬OjERF基因的克隆與功能研究[D]. 李聰.北京林業(yè)大學 2013
[3]基于高通量測序技術的藥用植物表達序列標簽系統(tǒng)的構建與應用[D]. 李瀅.中國協和醫(yī)科大學 2010
[4]紅豆杉中與異戊二烯代謝途徑相關的AP2類轉錄調控因子的克隆與功能研究[D]. 戴怡齡.復旦大學 2008

碩士論文
[1]轉錄因子PAP2對丹參酚酸類產物合成的影響[D]. 劉芬.陜西師范大學 2011



本文編號：3718696