發(fā)布時(shí)間：2022-10-21 09:33

　　卵型家族蛋白（OVATE FAMILY PROTEINS,OFPs）是一類植物特有的轉(zhuǎn)錄因子蛋白,在擬南芥、水稻、辣椒、番茄、香蕉等雙子葉和單子葉植物中廣泛存在。OFPs在胚珠和維管束的形成、果實(shí)形狀形成、DNA的修復(fù)、次生細(xì)胞壁的形成、果實(shí)成熟等植物生長(zhǎng)發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。同時(shí),OFPs還參與赤霉素（GA,Gibberellin）、油菜素內(nèi)酯（BR,Brassinolide）、乙烯（Ethylene）等激素的合成代謝和信號(hào)傳遞的過程。在擬南芥中過表達(dá)OFPs會(huì)導(dǎo)致葉片變短變圓、種莢變短變寬,擬南芥OFPs蛋白發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制的作用。在單子葉模式植物水稻（Oryza Sativa）中,OsOFP2過表達(dá)引起葉片變短變窄,OsOFP2可能通過與KNEX和BELL家族中的蛋白互作來抑制GA的合成;OsOFP8過表達(dá)植株葉片傾角增大,反之減小,OsOFP8通過與Os GKS2互作被磷酸化后運(yùn)輸至細(xì)胞核外。本研究前期結(jié)果顯示,OsOFP22過表達(dá)植株表現(xiàn)出節(jié)間短縮、葉片變短變寬、葉綠素含量高,種子變短變圓、晚花等表型;轉(zhuǎn)基因幼苗對(duì)GA敏感性提高,對(duì)BR敏感性降低。為進(jìn)一步研究OsOFP22調(diào)節(jié)... 

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞對(duì)照表
第1章 緒論
    1.1 植物轉(zhuǎn)錄因子簡(jiǎn)介
    1.2 OFPs轉(zhuǎn)錄因子的發(fā)現(xiàn)、結(jié)構(gòu)及其功能
        1.2.1 OFPs轉(zhuǎn)錄因子的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 OFPs轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 OFPs轉(zhuǎn)錄因子的功能
    1.3 OFPs轉(zhuǎn)錄因子與植物激素的關(guān)系
        1.3.1 OFPs轉(zhuǎn)錄因子與赤霉素的關(guān)系
        1.3.2 OFPs轉(zhuǎn)錄因子與油菜素內(nèi)酯的關(guān)系
        1.3.3 OFPs轉(zhuǎn)錄因子與乙烯的關(guān)系
    1.4 水稻OsOFP22轉(zhuǎn)錄因子的研究現(xiàn)狀
    1.5 Crispr/Cas9系統(tǒng)的介紹
    1.6 研究目的與意義
第2章 構(gòu)建Crispr/Cas9載體
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株材料
        2.1.2 植物材料
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑
        2.1.5 引物
        2.1.6 基因Locs號(hào)
        2.1.7 軟件
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 設(shè)計(jì)sgRNA
        2.2.2 提取植物基因組DNA
        2.2.3 瓊脂糖凝膠制作及核酸電泳
        2.2.4 擴(kuò)增目的片段
        2.2.5 純化目的片段
        2.2.6 體外驗(yàn)證靶點(diǎn)效率
        2.2.7 載體構(gòu)建轉(zhuǎn)化大腸桿菌及測(cè)序
        2.2.8 制備電擊法農(nóng)桿菌感受態(tài)
        2.2.9 電擊法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        2.2.10 鑒定農(nóng)桿菌陽性克隆
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 設(shè)計(jì)基因的靶點(diǎn)RNA
        2.3.2 Kitaake基因組DNA提取
        2.3.3 目的基因PCR產(chǎn)物
        2.3.4 體外檢測(cè)靶點(diǎn)效率
        2.3.5 Crispr/Cas9載體構(gòu)建
        2.3.6 鑒定大腸桿菌陽性克隆
        2.3.7 鑒定農(nóng)桿菌陽性克隆
    2.4 結(jié)論與討論
        2.4.1 結(jié)論
        2.4.2 討論
第3章 遺傳轉(zhuǎn)化、陽性苗鑒定及表型初步分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)藥品
        3.1.5 溶液的配制
        3.1.6 引物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 遺傳轉(zhuǎn)化水稻愈傷
        3.2.2 潮霉素篩選水稻轉(zhuǎn)基因種子
        3.2.3 提取轉(zhuǎn)基因和野生型水稻DNA
        3.2.4 提取水稻RNA及反轉(zhuǎn)錄
        3.2.5 實(shí)時(shí)定量熒光PCR
        3.2.6 擴(kuò)增插入基因組的片段
        3.2.7 油菜素內(nèi)酯類化合物處理BL6
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 遺傳轉(zhuǎn)化水稻愈傷過程
        3.3.2 水稻DNA提取結(jié)果
        3.3.3 PCR擴(kuò)增插入水稻基因組的Crispr/Cas9載體片段
        3.3.4 BL5、BL6和野生型的總RNA提取
        3.3.5 BL5、BL6中OsOFPs轉(zhuǎn)錄水平的變化
        3.3.6 BL5、BL6 T1代植株生長(zhǎng)
        3.3.7 BL處理引起B(yǎng)L6幼苗葉片傾角變大
    3.4 結(jié)論與討論
        3.4.1 結(jié)論
        3.4.2 討論
第4章 OsOFP22轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄活性的確定
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 菌株與載體
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑
        4.1.5 溶液的配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 擴(kuò)繁DH5α陽性克隆及質(zhì)粒提取
        4.2.2 制作瓊脂糖凝膠及核酸電泳
        4.2.3 擬南芥點(diǎn)種和移苗
        4.2.4 游離擬南芥原生質(zhì)體及轉(zhuǎn)化
        4.2.5 測(cè)定LUC和GUS值
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 質(zhì)粒電泳結(jié)果
        4.3.2 GUS相對(duì)活性
    4.4 結(jié)論與討論
        4.4.1 結(jié)論
        4.4.2 討論
第5章 OsOFP22轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)的下游基因鑒定
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 推斷的下游基因的Qpcr引物
        5.1.2 推斷的下游基因的Lcos號(hào)
        5.1.3 植物材料
        5.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.5 實(shí)驗(yàn)藥品
        5.1.6 溶液的配制
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 水稻催芽及提取總RNA
        5.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR及數(shù)據(jù)分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 OsOFP22過表達(dá)、BL6和野生型水稻總RNA結(jié)果
        5.3.2 推斷的下游基因在OsOFP22過表達(dá)和BL6幼苗中的相對(duì)表達(dá)量
    5.4 結(jié)論與討論
        5.4.1 結(jié)論
        5.4.2 討論
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]水稻理想株型的遺傳基礎(chǔ)研究[J]. 冷語佳,錢前,曾大力.  中國稻米. 2014(02)
[2]Brassinosteroid Signaling and Application in Rice[J]. Hongning Tong,Chengcai Chu State Key Laboratory of Plant Genomics and Center for Plant Gene Research(Beijing),Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences,Beijing 100101,China.  遺傳學(xué)報(bào). 2012(01)

博士論文
[1]水稻OsOFP轉(zhuǎn)錄因子家族基因克隆與功能分析[D]. 于慧.吉林大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3695384