本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),TaERFL1a基因的轉(zhuǎn)錄水平在凍脅迫小麥幼苗葉片內(nèi)顯著上調(diào),推測TaERFL1a轉(zhuǎn)錄因子在小麥響應(yīng)非生物逆境脅迫中發(fā)揮了重要功能。本研究利用大麥條紋花葉病病毒誘導(dǎo)的基因沉默（barley stripe mosaic virus-virus induced gene-silencing,BSMV-VIGS）技術(shù),探究了TaERFL1a基因在小麥響應(yīng)干旱脅迫和籽粒淀粉合成中的功能,并通過酵母雙雜交文庫篩選,鑒定了TaERFL1a轉(zhuǎn)錄因子的互作蛋白。主要研究結(jié)果如下:（1）從小麥中分離出TaERFL1a基因,它的編碼域（CDS）為732 bp,編碼一個243個氨基酸組成的蛋白,親緣性比對結(jié)果顯示,它與ERF家族其它成員關(guān)系較遠(yuǎn),推測TaERFL1a是小麥中ERF家族B1亞族中的新成員,在小麥中有新的功能。煙草瞬時表達(dá)分析TaERFL1a具有典型的核定位特征。（2）熒光定量PCR檢測數(shù)據(jù)表明TaERFL1a基因受低溫、高鹽、干旱和脫落酸顯著誘導(dǎo)表達(dá)。BSMV-VIGS試驗結(jié)果表明,TaERFL1a基因沉默植株顯著降低了對20%PEG6000誘導(dǎo)的干旱脅迫的抗性。研究結(jié)果... 

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)與分類
        1.1.1 AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子起源
        1.1.2 AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特征與分類
    1.2 AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展
        1.2.1 AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子在生物脅迫中的作用
        1.2.2 AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子在非生物脅迫中的作用
    1.3 小麥中AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展
    1.4 BSMV-VIGS技術(shù)
    1.5 酵母雙雜交技術(shù)
        1.5.1 酵母雙雜交技術(shù)原理
        1.5.2 酵母雙雜交技術(shù)優(yōu)點
    1.6 本研究的目的與意義
2 TaERFL1a轉(zhuǎn)錄因子特性研究
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 試驗材料
        2.2.2 試驗方法
        2.2.3 小麥葉片總RNA提取
        2.2.4 DNaseI處理
        2.2.5 cDNA第一鏈合成
        2.2.6 PCR檢測cDNA質(zhì)量
        2.2.7 cDNA全長的克隆、鑒定與轉(zhuǎn)化
        2.2.8 TaERFL1a亞細(xì)胞定位載體構(gòu)建
        2.2.9 農(nóng)桿菌浸染煙草GFP瞬時表達(dá)
        2.2.10 基因序列生物信息學(xué)分析
    2.3 研究結(jié)果
        2.3.1 TaERFL1a基因的克隆和結(jié)構(gòu)研究
        2.3.2 TaERFL1a轉(zhuǎn)錄因子的亞細(xì)胞定位研究
    2.4 結(jié)論與討論
3 TaERFL1a轉(zhuǎn)錄因子在小麥抗旱中功能
    3.1 引言
    3.2 材料方法
        3.2.1 試驗材料
        3.2.2 試驗方法
    3.3 試驗結(jié)果
        3.3.1 不同非生物脅迫和脫落酸處理后TaERFL1a基因表達(dá)
        3.3.2 BSMV-TaERFL1a載體構(gòu)建及病毒產(chǎn)物檢測
        3.3.3 TaERFL1a基因沉默植株的獲得
        3.3.4 TaERFL1a在小麥中抗旱的功能研究
    3.4 結(jié)論與討論
4 TaERFL1a在小麥籽粒淀粉合成中的功能
    4.1 引言
    4.2 材料方法
        4.2.1 試驗材料
        4.2.2 試驗方法
    4.3 試驗結(jié)果
        4.3.1 TaERFL1a基因沉默植株的獲得
        4.3.2 TaERFL1a在小麥籽粒淀粉合成中的功能
    4.4 結(jié)論與討論
5 酵母雙雜交篩選TaERFL1a的互作蛋白
    5.1 引言
    5.2 材料方法
        5.2.1 試驗材料
        5.2.2 菌株及質(zhì)粒
        5.2.3 培養(yǎng)基及試驗試劑
        5.2.4 酵母雙雜交誘餌載體構(gòu)建
        5.2.5 TaERFL1a誘餌載體的轉(zhuǎn)化
        5.2.6 TaERFL1a轉(zhuǎn)錄因子自激活活性的檢測
        5.2.7 酵母雙雜交文庫的篩選
        5.2.8 陽性克隆的序列比對
        5.2.9 互作蛋白基因在不同非生物脅迫下的表達(dá)
        5.2.10 蛋白互作驗證
    5.3 試驗結(jié)果
        5.3.1 轉(zhuǎn)錄激活活性研究
        5.3.2 酵母文庫篩選結(jié)果
    5.4 結(jié)論與討論
6 TaERFL1a與TaSGT1和TaDAD2蛋白質(zhì)互作驗證
    6.1 引言
    6.2 材料方法
        6.2.1 試驗材料
        6.2.2 試驗方法
    6.3 試驗結(jié)果
    6.4 結(jié)論與討論
本研究主要結(jié)論、創(chuàng)新點及下一步研究計劃
攻讀碩士學(xué)位期間學(xué)術(shù)論文及獲得榮譽
參考文獻(xiàn)
ABSTRACT


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]植物AP2/ERF類轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展[J]. 張計育,王慶菊,郭忠仁.  遺傳. 2012(07)
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碩士論文
[1]水楊酸提高小麥幼苗抗旱性的蛋白質(zhì)組學(xué)研究及其與抗壞血酸和谷胱甘肽的關(guān)系[D]. 李鴿子.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號：3692430