本研究以向日葵（Helianthus annuus L.）品種2603為材料,首先利用正交設(shè)計(jì)法對(duì)向日葵種子的IEF-SDS-PAGE雙向電泳條件（上樣量、一向等電聚焦時(shí)間、聚丙烯酰胺凝膠濃度）進(jìn)行了優(yōu)化,建立了一套較適宜的以向日葵種子為材料的雙向電泳技術(shù)體系,此體系是上樣量為3.5mg,一向聚焦時(shí)間為5h,聚丙烯酰胺凝膠濃度為12.5%;其次再以不同授粉時(shí)間的向日葵子房作為研究對(duì)象,通過采用已優(yōu)化好的雙向電泳條件,對(duì)向日葵未授粉的子房以及授粉7天和授粉28天的子房進(jìn)行差異蛋白分析。結(jié)果顯示,不同授粉時(shí)間的向日葵子房經(jīng)ImageMaster-Dplatinum5.0軟件分析可識(shí)別的差異蛋白點(diǎn)數(shù)約為87、122和183個(gè),選取表達(dá)量在3倍以上的13個(gè)差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析,初步鑒定有12個(gè)差異蛋白在向日葵種子形成過程中具有重要作用和功能,這些蛋白質(zhì)分別是:貯藏蛋白11S球蛋白G3、谷蛋白、烯醇酶、捕光葉綠素蛋白復(fù)合體亞基β1、26S蛋白酶調(diào)節(jié)亞基、熱休克蛋白、蔗糖果糖基轉(zhuǎn)移酶、ATP合酶β亞基、線粒體甘氨酸脫羧酶復(fù)雜P蛋白、聚光葉綠素蛋白復(fù)合物、磷酸甘油酸變位酶和S-腺苷甲硫氨酸合成酶;... 

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 植物蛋白質(zhì)組學(xué)研究概況
        1.1.1 植物蛋白質(zhì)(2-DE)樣品的制備
        1.1.2 雙向電泳技術(shù)
        1.1.3 蛋白質(zhì)質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)
        1.1.4 向日葵蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展
    1.2 植物代謝組學(xué)的研究概況
    1.3 本研究的目的和意義
    1.4 本研究的技術(shù)路線
第二章 向日葵種子蛋白質(zhì)的提取及雙向電泳體系優(yōu)化的研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 向日葵種子蛋白質(zhì)的提取方法
        2.2.2 蛋白定量
        2.2.3 水化
        2.2.4 向日葵種子雙向電泳體系的優(yōu)化
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 向日葵種子差異蛋白正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.2 上樣量對(duì)向日葵種子蛋白質(zhì)雙向電泳分辨率的影響
        2.3.3 等電聚焦時(shí)間對(duì)向日葵種子差異蛋白的影響
        2.3.4 膠濃度對(duì)向日葵種子差異蛋白的影響
    2.4 討論
        2.4.1 上樣量對(duì) 2-DE圖譜的影響
        2.4.2 一向等電聚焦時(shí)間對(duì) 2-DE圖譜的影響
        2.4.3 其它因素對(duì)向日葵雙向電泳的影響
    2.5 本章小結(jié)
第三章 向日葵種子形成過程中差異蛋白質(zhì)組學(xué)的研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 差異蛋白點(diǎn)的選取
        3.2.2 差異蛋白點(diǎn)的膠內(nèi)切取和酶解
        3.2.3 MALDI-TOF/TOF-MS質(zhì)譜鑒定及數(shù)據(jù)庫(kù)檢索
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 不同授粉時(shí)間向日葵子房差異蛋白質(zhì)雙向電泳的圖譜結(jié)果
        3.3.2 不同授粉時(shí)間向日葵子房差異蛋白質(zhì)的質(zhì)譜鑒定結(jié)果
        3.3.3 向日葵種子形成過程中的關(guān)鍵蛋白
        3.3.4 向日葵種子形成過程中差異蛋白功能分類
        3.3.5 向日葵種子形成過程中差異蛋白質(zhì)在擬南芥數(shù)據(jù)庫(kù)中的蛋白映射
    3.4 討論
        3.4.1 向日葵種子形成過程中的關(guān)鍵蛋白功能分析
        3.4.2 向日葵種子形成過程中差異蛋白質(zhì)在擬南芥數(shù)據(jù)庫(kù)中的映射分析
    3.5 本章小結(jié)
        3.5.1 不同授粉時(shí)間向日葵子房雙向電泳圖譜鑒定結(jié)果
        3.5.2 不同授粉時(shí)間向日葵子房差異蛋白質(zhì)的質(zhì)譜鑒定結(jié)果
        3.5.3 向日葵種子形成過程中的關(guān)鍵蛋白分類
        3.5.4 向日葵種子形成過程中差異蛋白質(zhì)在擬南芥數(shù)據(jù)庫(kù)中的蛋白映射
第四章 向日葵種子形成過程中代謝組學(xué)研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 樣品處理方法的優(yōu)化
        4.2.2 樣品提取條件的優(yōu)化
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)方案
        4.2.4 數(shù)據(jù)分析方法
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.2 內(nèi)標(biāo)物選擇結(jié)果
        4.3.3 不同授粉時(shí)間的向日葵子房代謝物定性及定量結(jié)果
        4.3.4 不同授粉時(shí)間的向日葵子房代謝物比較
        4.3.5 不同授粉時(shí)期的向日葵子房代謝組學(xué)分析
        4.3.6 不同授粉時(shí)間的向日葵子房標(biāo)志性代謝差異物的查找
    4.4 討論
        4.4.1 基于GC-MS聯(lián)用的向日葵代謝組學(xué)分析前處理研究
        4.4.2 基于GC-MS聯(lián)用的向日葵代謝組學(xué)研究
    4.5 本章小結(jié)
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
實(shí)驗(yàn)試劑
攻讀碩士學(xué)位論文期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[3]核桃楸（Juglans mandshurica Maxim.）胚胎學(xué)研究[D]. 孟穎.東北林業(yè)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3689738