玉米（Zea mays L.）屬禾本科、玉米屬植物,是世界上重要的糧食作物之一,有關(guān)玉米的遺傳改良研究一直是農(nóng)業(yè)科學(xué)領(lǐng)域重要的問題,玉米的遺傳改良方法也深受關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)采用超聲波花粉介導(dǎo)法獲得了轉(zhuǎn)GFP基因玉米,旨在考察通過該轉(zhuǎn)基因方法獲得材料的農(nóng)藝性狀及遺傳穩(wěn)定性,本實(shí)驗(yàn)主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.轉(zhuǎn)GFP基因玉米的獲得。利用超聲波輔助花粉介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法將帶有GFP基因的質(zhì)粒導(dǎo)入自交系‘鄭58’花粉中并人工授粉,獲得結(jié)實(shí)植株6株,玉米籽粒15粒,結(jié)實(shí)率為13%。經(jīng)PCR檢測之后,其中6株為陽性植株。以收獲的15粒種子為基數(shù),用花粉介導(dǎo)法所獲得T1代種子的陽性率約為40%。2.對轉(zhuǎn)基因玉米自交后代農(nóng)藝性狀的分析。T2代轉(zhuǎn)基因的玉米植株的田間農(nóng)藝性狀的調(diào)查分析顯示,在莖粗上,除了T2-6之外,其它株系同對照相比均有顯著性差異;除T2-5和T2-1株系出現(xiàn)諸如株高和穗位高的顯著差異外,T2代轉(zhuǎn)基因玉米植株同非轉(zhuǎn)化對照組比較,它們主要的農(nóng)藝性狀基本一致。3.T2代轉(zhuǎn)基因玉米植株的室內(nèi)考種結(jié)果顯示,除了T2-4和T2-5之外,其他株系的穗長與非轉(zhuǎn)化對照組相比均有顯著差異;所有株系的穗粗同對照組相比... 

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 轉(zhuǎn)基因玉米的研究意義
    1.2 植物轉(zhuǎn)基因方法的研究
        1.2.1 基因槍轟擊法
        1.2.2 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法
        1.2.3 花粉管通道法
        1.2.4 超聲波花粉介導(dǎo)法
    1.3 轉(zhuǎn)基因植物研究中中常使用的報(bào)告基因—綠色熒光蛋白
        1.3.1 綠色熒光蛋白的生化性質(zhì)以及發(fā)光機(jī)制
        1.3.2 綠色熒光蛋白的特點(diǎn)以及應(yīng)用前景
    1.4 轉(zhuǎn)基因植物中不同轉(zhuǎn)化方法外源基因整合表達(dá)的特性
    1.5 本課題研究目的及意義
2 超聲波花粉介導(dǎo)法獲得轉(zhuǎn)GFP基因玉米
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 受體材料
        2.1.2 供體材料
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑的配制
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 大腸桿菌的培養(yǎng)
        2.2.2 質(zhì)粒DNA的提取
        2.2.3 轉(zhuǎn)化方法—超聲波花粉介導(dǎo)法
        2.2.4 T_1代轉(zhuǎn)化玉米植株的陽性材料檢測
        2.2.5 玉米種子的萌發(fā)
        2.2.6 T_2代種子的獲得
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 T_o代玉米轉(zhuǎn)化植株結(jié)實(shí)情況統(tǒng)計(jì)
        2.3.2 T_1代玉米轉(zhuǎn)化植株的PCR檢測結(jié)果
        2.3.3 T_2代轉(zhuǎn)化植株GFP觀察篩選結(jié)果
    2.4 討論
3 轉(zhuǎn)GFP基因玉米自交后代農(nóng)藝性狀的分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 田間農(nóng)藝性狀的調(diào)查分析
        3.4.2 室內(nèi)考種的結(jié)果
        3.4.3 T_2代轉(zhuǎn)基因玉米變異植株的分析
    3.5 討論
4 轉(zhuǎn)基因玉米遺傳特性的分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)所需試劑以及配制
        4.1.3 主要儀器和設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 遺傳規(guī)律分析
        4.2.2 轉(zhuǎn)基因玉米RT-PCR的檢測
        4.2.3 轉(zhuǎn)基因玉米western-blot雜交檢測
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 T_2代玉米植株孟德爾單基因顯性遺傳定律的驗(yàn)證
        4.3.2 轉(zhuǎn)基因玉米RT-PCR的結(jié)果分析
        4.3.3 轉(zhuǎn)基因玉米western-blot的結(jié)果分析
    4.4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]GFP綠色熒光法輔助篩選玉米轉(zhuǎn)基因植株[J]. 段學(xué)清,鄭莉茹,劉文波,侯緒剛,郭玉玉,謝芳蕊,王文倩,安海龍.  玉米科學(xué). 2017(02)
[2]基因槍法介導(dǎo)大白菜小孢子轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究初報(bào)[J]. 李菲,張淑江,章時(shí)蕃,武劍,王曉武,張慧,孫日飛,張振賢.  園藝學(xué)報(bào). 2017(01)
[3]花粉介導(dǎo)法獲得耐草甘膦玉米植株及其耐性研究[J]. 楊慧珍,任志強(qiáng),肖建紅,卜華虎,劉惠民.  生物技術(shù)通報(bào). 2016(11)
[4]轉(zhuǎn)水稻OsSIK1基因玉米植株的獲得及抗旱性分析[J]. 郝曜山,張歡歡,杜建中,王亦學(xué),孫毅.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2016(05)
[5]花粉介導(dǎo)的花青素調(diào)節(jié)基因NtAn2轉(zhuǎn)化玉米研究[J]. 郭天璐,張歡歡,杜建中,郝曜山,崔貴梅,王亦學(xué),孫毅.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(04)
[6]玉米轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢[J]. 張彥琴.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(32)
[7]運(yùn)用基因槍法進(jìn)行蛹蟲草遺傳轉(zhuǎn)化的研究[J]. 茅文俊,鮑大鵬,周陳力,李燕,譚琦,汪瀅.  園藝學(xué)報(bào). 2015(09)
[8]超聲波輔助花粉介導(dǎo)法獲得轉(zhuǎn)BtCry1Ac基因玉米的研究[J]. 南芝潤,惠國強(qiáng),羅綺,宋紅霞,吳家和,孫毅,張紅梅.  黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(09)
[9]抗蟲耐草甘膦雙價(jià)基因表達(dá)載體的構(gòu)建及玉米轉(zhuǎn)化[J]. 余桂容,曹穎,杜文平,宋軍,陳謙,徐利遠(yuǎn).  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2015(02)
[10]hrpZPsg12基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及花粉管通道法轉(zhuǎn)化玉米的初步研究[J]. 吳庠玉,盧寶慧,鄭玲,彭振英,馬貴龍,高潔.  吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(01)

碩士論文
[1]光敏色素基因在轉(zhuǎn)基因玉米株系基因組的整合位點(diǎn)[D]. 劉鑫.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]轉(zhuǎn)BADH基因玉米與非轉(zhuǎn)化受體生長、生理特性及農(nóng)藝性狀比較[D]. 劉曉璐.山西師范大學(xué) 2016
[3]水稻OsSRT基因的轉(zhuǎn)基因后代的遺傳特性及生理表現(xiàn)的研究[D]. 冉繁骉.黑龍江大學(xué) 2016
[4]增強(qiáng)UV-B輻射對擬南芥葉綠體蛋白質(zhì)組影響的研究[D]. 田雪.山西師范大學(xué) 2015
[5]花粉介導(dǎo)法獲得轉(zhuǎn)耐鹽基因AhCMO玉米植株的研究[D]. 任小燕.山西大學(xué) 2013
[6]T-DNA在農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因玉米中的整合模式[D]. 楊琳.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]小麥成熟胚受體篩選及基因槍法轉(zhuǎn)幾丁質(zhì)酶基因植株獲得和插入位點(diǎn)研究[D]. 李曄.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[8]轉(zhuǎn)基因大麥的gfp基因遺傳表達(dá)及整合位點(diǎn)結(jié)構(gòu)[D]. 趙梅香.揚(yáng)州大學(xué) 2007
[9]轉(zhuǎn)基因大麥gfp基因在雜交后代中的表達(dá)及轉(zhuǎn)基因座位結(jié)構(gòu)研究[D]. 黃潔.揚(yáng)州大學(xué) 2007
[10]轉(zhuǎn)基因棉花材料獲得及主要農(nóng)藝性狀變異分析[D]. 劉冬梅.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2006



本文編號：3657192