茶樹[Camellia sinensis（L.）O.Kuntze]為多年生葉用植物,一年中新梢的多次采摘帶走大量養(yǎng)分,氮是茶樹中含量最高的礦質(zhì)元素,也是茶葉中多種重要的有機(jī)物質(zhì)組成成分,因而茶樹對(duì)氮肥的需求量很高。本研究首先明確了茶樹種質(zhì)資源的一芽二葉、紅梗綠莖著生葉、麻梗著生葉氮濃度、氮利用效率（Nitrogen Utilization Efficiency,NUtE）、紅梗綠莖著生葉與麻梗著生葉氮再利用效率（Nitrogen Remobilization Efficiency,NRE）在生長(zhǎng)季（4月-10月）的動(dòng)態(tài)變化;本文從PacBio全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果鑒定出3個(gè)茶樹自噬相關(guān)基因（AuTophaGy-related genes,ATG genes）CsATG2、CsATG18f-1與CsATG18f-2,通過遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)獲得了超表達(dá)轉(zhuǎn)基因擬南芥株系,探討茶樹自噬相關(guān)基因介導(dǎo)的氮分配、利用效率及再利用效率之間的關(guān)系。獲得的主要研究結(jié)果如下:（1）茶樹種質(zhì)資源一芽二葉、紅梗綠莖著生葉、麻梗著生葉的氮濃度在生長(zhǎng)季（4月-10月）動(dòng)態(tài)變化。同一茶樹品種的不同葉位氮濃度表現(xiàn)為一芽二葉>... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 引言
    2.植物細(xì)胞自噬的功能
        2.1 細(xì)胞自噬參與植物的生長(zhǎng)發(fā)育
        2.2 自噬參與植物免疫反應(yīng)
        2.3 自噬與營養(yǎng)的循環(huán)利用
    3 實(shí)驗(yàn)的目的和意義
第二章 茶樹種質(zhì)資源生長(zhǎng)季節(jié)不同嫩度葉片氮濃度動(dòng)態(tài)變化
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 試驗(yàn)材料
        2.2 主要試劑
        2.3 儀器設(shè)備
        2.4 試驗(yàn)方法
            2.4.1 取樣
            2.4.2 茶樹葉片氮濃度測(cè)定方法
        2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 茶樹種質(zhì)資源葉片氮濃度在生長(zhǎng)季節(jié)動(dòng)態(tài)變化
            3.1.1 茶樹種質(zhì)資源一芽二葉氮濃度在生長(zhǎng)季節(jié)動(dòng)態(tài)變化
            3.1.2 茶樹種質(zhì)資源紅梗綠莖著生葉氮濃度在生長(zhǎng)季節(jié)動(dòng)態(tài)變化
            3.1.3 茶樹種質(zhì)資源麻梗著生葉氮濃度在生長(zhǎng)季節(jié)動(dòng)態(tài)變化
        3.2 茶樹種質(zhì)資源氮利用效率在生長(zhǎng)季節(jié)動(dòng)態(tài)變化
        3.3 茶樹種質(zhì)資源氮再利用效率(NRE)在生長(zhǎng)季節(jié)動(dòng)態(tài)變化
            3.3.1 茶樹種質(zhì)資源紅梗綠莖著生葉NRE在生長(zhǎng)季節(jié)動(dòng)態(tài)變化
            3.3.2 茶樹種質(zhì)資源麻梗著生葉NRE在生長(zhǎng)季節(jié)動(dòng)態(tài)變化
    4 討論
第三章 茶樹自噬相關(guān)基因CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2的分離及氮高效利用
    1.材料
        1.1 植物材料
        1.2 菌株與質(zhì)粒
        1.3 主要試劑
        1.4 常用培養(yǎng)基及溶液配制
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 茶樹自噬相關(guān)基因CsATG2、CsATG18f-1及CsATG8f-2的克隆
            2.1.1 茶樹RNA提取及cDNA的合成
            2.1.2 目的基因的擴(kuò)增
        2.2 目的基因凝膠回收
        2.3 目的基因片段與p-TOPO載體連接
        2.4 陽性轉(zhuǎn)化子的鑒定
        2.5 超表達(dá)載體及亞細(xì)胞定位載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)化
            2.5.1 超表達(dá)載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)化
            2.5.2 亞細(xì)胞定位載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)化
        2.6 轉(zhuǎn)基因擬南芥的獲得
            2.6.1 蘸花法侵染擬南芥
            2.6.2 轉(zhuǎn)基因陽性純合子的篩選
        2.7 植物材料培養(yǎng)
        2.8 亞細(xì)胞定位
        2.9 擬南芥根尖自噬小體MDC染色
        2.10 透射電鏡觀察
        2.11 氨基態(tài)氮濃度測(cè)定
        2.12 基因表達(dá)量的檢測(cè)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 茶樹自噬相關(guān)基因CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2的克隆與表達(dá)分析
            3.1.1 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2的cDNA克隆
            3.1.2 茶樹ATG家族進(jìn)化分析
            3.1.3 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2超表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2 茶樹自噬基因CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2亞細(xì)胞定位
        3.3 茶樹自噬相關(guān)基因CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2對(duì)不同氮濃度的響應(yīng)
            3.3.1 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2超表達(dá)擬南芥植株在不同氮水平生長(zhǎng)勢(shì)差異
            3.3.2 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2超表達(dá)擬南芥在蕾薹期氨基態(tài)氮測(cè)定
            3.3.3 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2超表達(dá)擬南芥對(duì)氮吸收轉(zhuǎn)運(yùn)基因表達(dá)的影響
            3.3.4 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2超表達(dá)擬南芥株系在不同氮水平下氮營養(yǎng)累積量測(cè)定
            3.3.5 CsATG2、CsATG18f-1及CsATG18f-2超表達(dá)擬南芥株系在不同氮水平下自噬小體的檢測(cè)
    4 討論
參考文獻(xiàn)
附表1 茶樹轉(zhuǎn)錄組中自噬相關(guān)基因FPKM值
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2017年我國茶葉產(chǎn)業(yè)發(fā)展特點(diǎn)分析[J]. 胡林英,陳富橋,姜愛芹.  中國茶葉. 2018(04)
[2]氮素水平對(duì)茶樹新梢葉片代謝譜及其晝夜變化的影響[J]. 楊亦揚(yáng),馬立鋒,黎星輝,R.George Ratcliffe,Nicholas J.Kruger,阮建云.  茶葉科學(xué). 2013(06)
[3]不同樹齡的紫鵑茶樹營養(yǎng)元素變化規(guī)律研究[J]. 肖星,殷麗瓊,劉德和,夏銳,孫云南,楊毅堅(jiān),施自明.  湖南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(11)
[4]Environmental Problems From Tea Cultivation in Japan and a Control Measure Using Calcium Cyanamide[J]. K.OH,T.KATO.  Pedosphere. 2006(06)
[5]茶樹氮素利用效率相關(guān)生理生化指標(biāo)初探[J]. 王新超,楊亞軍,陳亮,阮建云.  作物學(xué)報(bào). 2005(07)

博士論文
[1]氮素對(duì)茶樹葉片品質(zhì)成分影響機(jī)理研究[D]. 楊亦揚(yáng).南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3637562