茶樹[Camelliasinensis（L.）O.Kuntze]是一種多年生常綠木本植物,屬山茶科山茶屬,是一種喜溫怕寒的經(jīng)濟(jì)作物。由茶樹葉片加工制作成的“茶”飲品被譽(yù)為“世界三大非酒精飲料”之一。環(huán)境脅迫不僅限制茶樹種植區(qū)的分布,還對經(jīng)濟(jì)作物造成一定的經(jīng)濟(jì)損失,其中低溫脅迫是影響茶樹生長發(fā)育、茶葉產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素。因此,提高茶樹抗寒性是目前茶樹研究人員亟待解決的課題。然而,從生理生態(tài)水平上培育抗寒性茶樹品種,不僅選育周期長還難以控制育種方向以獲得理想表型。所以,研究茶樹在非生物脅迫的分子響應(yīng)機(jī)制,通過生物技術(shù)手段有針對性地提高茶樹抗逆性,對選育茶樹抗性優(yōu)良品種具有重要意義。針對上述科學(xué)問題,本研究對茶樹類鈣調(diào)蛋白基因CsCML21啟動(dòng)子（Calmodulin like 21 promoter,pCsCML21）進(jìn)行功能分析,并從茶樹良種’龍井長葉’中擴(kuò)增出五個(gè)茶樹CML基因,利用生物信息學(xué)和分子生物學(xué)等技術(shù)手段深入研究了它們在低溫（10℃）、聚乙二醇6000（Polyethylene glycol 6000,PEG 6000）（20%）、氯化鈉（Sodium chloride,N... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２茶樹基因組ＤＮＡ??

Ｍ?１?２??麵??圖２－３?ＣｓＣＡ／Ｚ２／啟動(dòng)子的克隆??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｋｅｒ?（ＤＬ２０００）；?１：?啟動(dòng)子；２：?ＡＢＲＥ?元件缺失?ＧＣＡ／Ｚ２／啟動(dòng)子??Ｆｉｇ．２－３?Ｔｈｅ?ｃｌｏｎｅ?ｏｆ?ＣｓＣＭＬ２１?ｐｒｏｍｏｔｅｒ??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）；?１：?ｐＣｓＣＭＬ２１；２：?ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ??２．３質(zhì)粒及表達(dá)載體酶切鑒定??將測序正確的單克隆菌液和ｐＢＩＯｌ載體進(jìn)行質(zhì)粒提取，電泳檢測結(jié)果顯示有三條??片段很大的亮帶，且ｐＣｓＣＭＬ２１質(zhì)粒大小略大于ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ，表明質(zhì)粒提取無誤??符合進(jìn)行下一步要求（圖２－４Ａ）。??利用Ｘｂａ?Ｉ和Ｓｍａ?Ｉ酶對ｐＣｓＣＭＬ２１和ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切，酶切產(chǎn)物??在瓊脂糖凝膠中電泳分析得到了與目的條帶大小一致的條帶（圖２－４Ｂ），初步確定啟??動(dòng)子表達(dá)載體構(gòu)建成功，同時(shí)送南京金斯瑞生物公司測序，分析結(jié)果也表明目的片段??沒有發(fā)生堿基缺失和移碼

將測序正確的單克隆菌液和ｐＢＩＯｌ載體進(jìn)行質(zhì)粒提取，電泳檢測結(jié)果顯示有三條??片段很大的亮帶，且ｐＣｓＣＭＬ２１質(zhì)粒大小略大于ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ，表明質(zhì)粒提取無誤??符合進(jìn)行下一步要求（圖２－４Ａ）。??利用Ｘｂａ?Ｉ和Ｓｍａ?Ｉ酶對ｐＣｓＣＭＬ２１和ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切，酶切產(chǎn)物??在瓊脂糖凝膠中電泳分析得到了與目的條帶大小一致的條帶（圖２－４Ｂ），初步確定啟??動(dòng)子表達(dá)載體構(gòu)建成功，同時(shí)送南京金斯瑞生物公司測序，分析結(jié)果也表明目的片段??沒有發(fā)生堿基缺失和移碼，表達(dá)載體構(gòu)建成功。??Ｍ?１?２?３?Ｂ?Ｍ?１２?３??圖２－４質(zhì)粒提�。ǎ粒┘爸亟M載體酶切（Ｂ）??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）；?ｌ：ｐＢＩ１０１；?２：?ｐＢＩ?１０１－ｐＣｓＣＭＬ２１?；?３：?ｐＢ１１０１－ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ??Ｆｉｇ．２－４?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?（Ａ）?ａｎｄ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｖｅｃｔｏｒｓ?（Ｂ）??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）；?１：?ｐＢＩ１０１；２：?ｐＢＩ?１０１－ｐＣｓＣＭＬ２１；?３：?ｐＢＩ?１０１－ｐＣｓＣＭＬ２１－Ｍ??２．４農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化鑒定??以農(nóng)桿菌菌液為模板，分別用對應(yīng)的擴(kuò)增引物進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，在］．７?ｋｂ及１．５?ｋｂ??１７??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]茶樹CsbZIP4轉(zhuǎn)錄因子正調(diào)控?cái)M南芥對鹽脅迫響應(yīng)[J]. 曹紅利,王璐,錢文俊,郝心愿,楊亞軍,王新超.  作物學(xué)報(bào). 2017(07)
[2]植物鈣/鈣調(diào)素介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)[J]. 曾后清,張亞仙,汪尚,張夏俊,王慧中,杜立群.  植物學(xué)報(bào). 2016(05)
[3]大豆CML家族基因的生物信息學(xué)分析[J]. 陳超,端木慧子,朱丹,劉艾林,肖佳雷,朱延明.  大豆科學(xué). 2015(06)
[4]NO調(diào)節(jié)植物低溫脅迫抗性機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 牟雪姣,張遠(yuǎn)兵.  長江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版). 2015(21)
[5]茶樹P5CS基因克隆及其在滲透和高鹽脅迫下的表達(dá)分析[J]. 王麗珊,林清凡,陳蘭平,池福鈴,郭春芳,張積森.  熱帶作物學(xué)報(bào). 2015(01)
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[8]鹽脅迫對白樺種子萌發(fā)和幼苗生長的影響[J]. 許曉英.  中國林業(yè). 2011(01)
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[10]茶樹越冬后葉片含水量與耐寒性研究初報(bào)[J]. 李秀芬,房用,喬勇進(jìn),孟振農(nóng),范豐學(xué),尹波,樊秀京,陳家申,楊俊杰,史少軍.  山東林業(yè)科技. 2004(01)

碩士論文
[1]茶樹花粉CsE1α、CsCML21基因的亞細(xì)胞定位及啟動(dòng)子克隆與功能驗(yàn)證[D]. 杜昱林.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]低溫脅迫下茶樹花粉管相關(guān)基因的分離與表達(dá)分析[D]. 蔣芯.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]茶樹抗寒相關(guān)基因的克隆與表達(dá)特性分析[D]. 陳林波.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號：3562941