茶樹(shù)[Camellia sinensis（L.）O.Kuntze]起源于我國(guó)西南地區(qū),是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物之一,喜好在濕潤(rùn)、溫和的酸性環(huán)境中生長(zhǎng)。近年來(lái),極端天氣頻發(fā),“倒春寒”、持續(xù)干旱、高溫等不利條件嚴(yán)重影響了茶樹(shù)的正常生長(zhǎng)和代謝,降低了茶葉的品質(zhì),因此培育抗逆茶樹(shù)品種是當(dāng)前茶樹(shù)育種的主要目標(biāo)之一,然而,茶樹(shù)抗逆機(jī)制的研究還處于起步階段,鑒定的抗逆相關(guān)基因還很有限。植物中蔗糖非酵解I型相關(guān)激酶2（Sucrose non-fermenting 1-related protein kinases 2;SnRK2）與植物非生物脅迫響應(yīng)及ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)密切相關(guān)。本研究基于全基因組水平對(duì)茶樹(shù)中的SnRK2成員進(jìn)行了鑒定,分析了它們?cè)诮M織發(fā)育、ABA信號(hào)以及滲透脅迫中的表達(dá)模式,對(duì)其編碼的蛋白進(jìn)行了亞細(xì)胞定位分析,還將CsSnRK2.5在擬南芥中進(jìn)行過(guò)表達(dá),初步探究了其在干旱脅迫下的功能。取得的主要結(jié)果如下:1.利用茶樹(shù)基因組數(shù)據(jù)庫(kù),鑒定出了8個(gè)茶樹(shù)SnRK2基因,依次命名為CsSnRK2.1-CsSnRK2.8。基因結(jié)構(gòu)分析表明,茶樹(shù)SnRK2s具有較為保守的基因結(jié)構(gòu),所有成員均含有9個(gè)外顯... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 引言
    1.2 植物對(duì)非生物脅迫的響應(yīng)
        1.2.1 脅迫信號(hào)的感知
        1.2.2 脅迫信號(hào)的傳遞
        1.2.3 抗逆反應(yīng)的發(fā)生
    1.3 ABA與植物非生物脅迫
    1.4 植物中的SnRK2 蛋白激酶
        1.4.1 植物中SnRK2 成員的數(shù)目
        1.4.2 SnRK2 的結(jié)構(gòu)與分類(lèi)
        1.4.3 SnRK2 與滲透脅迫
        1.4.4 SnRK2活性的調(diào)控
        1.4.5 SnRK2 的底物
    1.5 本研究的目的及意義
第二章 茶樹(shù)SnRK2 家族基因的鑒定、表達(dá)分析及亞細(xì)胞定位
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 酶和試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)菌株及載體
        2.1.4 引物
        2.1.5 主要儀器
        2.1.6 培養(yǎng)基及營(yíng)養(yǎng)液
    2.2 方法
        2.2.1 茶苗的培養(yǎng)及處理
        2.2.2 茶樹(shù)SnRK2 蛋白的全基因組鑒定
        2.2.3 茶樹(shù)SnRK2 生物信息學(xué)分析
        2.2.4 茶樹(shù)總RNA提取和c DNA合成
        2.2.5 PCR擴(kuò)增及目的片段回收
        2.2.6 T載體連接
        2.2.7 轉(zhuǎn)化、涂板和菌液檢測(cè)
        2.2.8 質(zhì)粒提取
        2.2.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.10 亞細(xì)胞定位載體構(gòu)建
        2.2.11 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        2.2.12 農(nóng)桿菌侵染洋蔥表皮細(xì)胞
    2.3 結(jié)果分析
        2.3.1 茶樹(shù)SnRK2 蛋白激酶成員的確定
        2.3.2 不同物種SnRK2 的進(jìn)化分析
        2.3.3 基因結(jié)構(gòu)分析和motif分析
        2.3.4 茶樹(shù)SnRK2 在不同組織中的表達(dá)分析
        2.3.5 茶樹(shù)SnRK2對(duì)ABA信號(hào)的響應(yīng)
        2.3.6 茶樹(shù)SnRK2對(duì)PEG的響應(yīng)
        2.3.7 茶樹(shù)SnRK2對(duì)NaCl脅迫的響應(yīng)
        2.3.8 茶樹(shù)SnRK2 的亞細(xì)胞定位
    2.4 討論
第三章 茶樹(shù)CsSnRK2.5 的功能分析
    3.1 材料與試劑
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 酶和試劑
        3.1.3 菌株及載體
        3.1.4 主要儀器
        3.1.5 引物
        3.1.6 培養(yǎng)基及試劑
    3.2 方法
        3.2.1 CsSnRK2.5 序列分析
        3.2.2 載體構(gòu)建
        3.2.3 定點(diǎn)突變
        3.2.4 酵母雙雜交(Y2H)
        3.2.5 SDS-PAGE分析
        3.2.6 原核蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及His標(biāo)簽蛋白純化
        3.2.7 CsSnRK2.5 自激活分析
        3.2.8 擬南芥種植及花序侵染
        3.2.9 轉(zhuǎn)基因擬南芥的鑒定
        3.2.10 擬南芥干旱處理及生理指標(biāo)測(cè)定
    3.3 結(jié)果分析
        3.3.1 CsSnRK2.5 序列分析
        3.3.2 CsSnRK2.5與A類(lèi) PP2C相互作用
        3.3.3 Ser177 突變影響CsSnRK2.5 的自激活活性
        3.3.4 CsSnRK2.5 在干旱脅迫下的功能分析
    3.4 討論
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
    1 本研究中基因的CDS序列
    2 本文主要載體信息
    3 重疊延伸PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)突變
    4 培養(yǎng)基及相關(guān)試劑的配制
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：3553003