干旱等非生物脅迫與種子活力衰減是世界農(nóng)業(yè)生產(chǎn)面臨的兩大主要問題。棉子糖系列寡糖（Raffinose family oligosaccharides,RFOs）代謝通路與植物非生物脅迫抗性及種子活力建成密切相關(guān)。肌醇半乳糖苷合成酶（GOLS）、棉子糖合成酶（RS）以及水蘇糖合成酶（STS）是植物RFOs合成通路中的三個(gè)關(guān)鍵酶。目前關(guān)于RFOs代謝通路關(guān)鍵酶的分子生物學(xué)研究多集中在肌醇半乳糖苷酶（GOLS）,鮮見植物棉子糖合成酶（RS）基因相關(guān)報(bào)道。RFOs代謝在植株抗旱及種子活力建成中的作用仍不清晰。本研究以玉米棉子糖合成酶（ZmRS）為切入點(diǎn),對不同遺傳背景的玉米棉子糖合成酶（ZmRS）基因突變體（zmrs）及相關(guān)基因擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化材料進(jìn)行糖組分鑒定、干旱抗性差異評測、種子活力評測等相關(guān)試驗(yàn),研究了RFOs代謝在植物耐旱及種子活力調(diào)控中的功能。獲得的主要研究結(jié)果簡述如下:（1）通過同源克隆方法,發(fā)現(xiàn)了玉米基因組中唯一一個(gè)棉子糖合成酶基因（ZmRS,GRMZM2G150906）。該基因編碼產(chǎn)物（ZmRS）體外具有棉子糖（Raffinose）合成活力;在蔗糖（Sucrose）不存在的條件下... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：136 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

棉子糖系列寡糖主要成員及其分子結(jié)構(gòu)式

圖 1-2 棉子糖系列寡糖代謝通路及其在植物中的生理功能。Fig. 1-2 Metabolism pathway of RFOs and its presumptive physiological function in plants.1.2.2.1 肌醇半乳糖苷合成酶（GOLS）GOLS 以 UDP-半乳糖苷（UDP-Galactose，CAS: 2956-16-3）與肌醇（myo-inositol，CAS: 6917-35-7）為底物，催化合成肌醇半乳糖苷（Galactinol，CAS: 3687-64-7），同時(shí)

棉子糖系列寡糖（RFOs）在玉米與擬南芥植株抗旱及種子活力中的功能研究8℃變性 10 s，60℃退火延伸 3 min，共 28 個(gè)循環(huán)；72℃延電泳檢測，并將 2.4Kb 處條帶進(jìn)行切膠回收（E.Z.N.AGel核表達(dá)載體經(jīng) BamHⅠ/HindⅢ（Takara）雙酶切，0.8% 瓊.Z.N.AGelExtractionKit，OMEGA）。ZmRSCDS 區(qū)片段經(jīng)切后進(jìn)行純化回收（E.Z.N.A Cycle Pure Kit，OMEGA）d 片段經(jīng)電泳檢測后，使用 T4 連接酶（Promega）進(jìn)行連桿菌感受態(tài)細(xì)胞。經(jīng) 37℃培養(yǎng)過夜后，菌落 PCR 篩選陽行擴(kuò)大培養(yǎng)并進(jìn)行質(zhì)粒提取、酶切驗(yàn)證獲得 ZmRS-His6 制備采用堿裂解法，具體操作參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南第三框架見圖 2-1A，酶切驗(yàn)證見圖 2-1B。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]功能性低聚糖析論[J]. 鄭建仙,耿立萍.  食品與發(fā)酵工業(yè). 1997(01)



本文編號：3522113