在植物基因表達(dá)調(diào)控的過程中,啟動(dòng)子作為調(diào)控基因表達(dá)的順式元件起著重要作用。為了篩選在玉米早期籽粒中強(qiáng)表達(dá)的啟動(dòng)子,選取6個(gè)啟動(dòng)子pCaMV35SD、pUbiquitin、pZmActin1、pZmSTK2、pZm66589和pZmbHLH148,分別構(gòu)建EGFP表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染玉米原生質(zhì)體,快速驗(yàn)證載體功能構(gòu)建的正確性;同時(shí)采用花粉磁轉(zhuǎn)染法將6個(gè)表達(dá)載體導(dǎo)入玉米自交系鄭58中,并對不同啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的EGFP載體在授粉后48h玉米籽粒中的熒光強(qiáng)度和熒光檢出率進(jìn)行觀察和統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表明,6個(gè)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)EGFP表達(dá)載體構(gòu)建正確;pCaMV35SD啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)EGFP表達(dá)載體的熒光最強(qiáng),6個(gè)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)EGFP表達(dá)載體由強(qiáng)到弱依次為pCaMV35SD>pZmSTK2>pZm66589>pZmbHLH148>pUbiquitin>pZmActin1,其熒光檢出率分別為27.17%、27.17%、29.83%、23.84%、13.40%和30.57%。 

【文章來源】：作物雜志. 2020,(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

6個(gè)啟動(dòng)子-EGFP表達(dá)載體構(gòu)建流程圖

分別取6個(gè)啟動(dòng)子-EGFP載體轉(zhuǎn)染玉米自交系鄭58，并在自交系鄭58授粉后48h取早期籽粒進(jìn)行熒光觀察。由圖4可見，p Ca MV35SD在鄭58早期籽粒中熒光表達(dá)量最強(qiáng)；6個(gè)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)EGFP表達(dá)由強(qiáng)到弱依次為pCaMV35SD>pZmSTK2>p Zm66589>p Zmb HLH148>p Ubiquitin>p Zm Actin1。2.4 轉(zhuǎn)染6個(gè)EGFP載體的鄭58籽粒在授粉后48h的熒光檢出率統(tǒng)計(jì)

啟動(dòng)子是產(chǎn)生m RNA和預(yù)期轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的必要條件，在玉米轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品研究中必不可少。不同啟動(dòng)子在不同物種、不同組織中表達(dá)水平不一樣。玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PEPC基因的啟動(dòng)子在葉肉細(xì)胞中高度活躍[24]；在玉米和煙草中，Zm Hy PRP基因啟動(dòng)子在轉(zhuǎn)基因植株中表現(xiàn)出胚特異性表達(dá)，但在玉米中的活性要低于煙草[25]；玉米Zpu1基因啟動(dòng)子在轉(zhuǎn)基因煙草中也顯示出胚特異性表達(dá)[26]。雙SUMO蛋白的基因啟動(dòng)子Zm DSUL被證明在卵細(xì)胞和受精卵中均可檢測到其轉(zhuǎn)錄本[27]。啟動(dòng)子具有物種和組織特異性，篩選在特定組織中表達(dá)較強(qiáng)的啟動(dòng)子，對于后續(xù)基因功能研究至關(guān)重要。圖4 不同啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)EGFP在鄭58早期籽粒中的瞬時(shí)表達(dá)情況

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3434252