杜仲（Eucommia ulmoides Oliver）是我國特有的經(jīng)濟樹種,含有豐富的次生代謝產(chǎn)物,因此具有很高的藥用價值。木脂素類化合物是杜仲中研究較多且功能較清晰的一大類化合物,其中松脂醇二葡萄糖苷（Pinoresinol digclucoside,PDG）與杜仲雙向調(diào)節(jié)血壓功效密切相關(guān)。本研究以杜仲皮為材料,克隆得到了與杜仲木脂素生物合成調(diào)控相關(guān)的Dirigent編碼基因（EuDIR1）,對該基因進行了系統(tǒng)的生物信息學(xué)分析。并對EuDIR1基因以及松脂醇雙糖苷進行時空表達分析研究。取得以下研究結(jié)果:1、EuDIR1基因克隆及序列分析本研究克隆的杜仲DIRs cDNA序列有468bp,不含內(nèi)含子,編碼155個氨基酸。推測的編碼蛋白的氨基酸序列與白美喬柏、五味子、連翹等同源性最高,具有的5個保守基序,第1¹48位之間是個高度保守的結(jié)構(gòu)功能域——Dirigent,通過聚類分析表明該基因編碼蛋白屬于DIR-a家族。通過在線軟件預(yù)測該基因編碼蛋白為親水性蛋白,相對分子質(zhì)量為17kD,理論等電點為4.91,不具有跨膜區(qū);亞細(xì)胞定位在細(xì)胞質(zhì)中,不屬于分泌蛋白;預(yù)測含有1... 

【文章來源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

松柏醇合成途徑Figture1.1ThesynthesispathwayofconiferyPAL,phenylalanineammonia-lyase;C4H,cinnamate4-hydroxylase;4CL,4-coumarate:CoAligase;C3H,

貴州大學(xué) 2017 屆 碩士研究生畢業(yè)論文氨酸通過 系列的催化反應(yīng)轉(zhuǎn)化而來(圖 1.1)( Vanholme et al., 2010)。(2)松柏醇向木脂素的轉(zhuǎn)化松柏醇是天然木脂素的合成的唯 前體，也是木質(zhì)素合成的前體。兩分子的松柏合形成 分子的松脂醇，該步驟是木脂素生物合成途徑的關(guān)鍵步驟。該反應(yīng)屬于自加成反應(yīng)：松柏醇自由基在酶及其它物質(zhì)的參與下共同完成，但酶體系還沒有完全出來。目前同化蛋白氧化酶（DIR）已在多種植物中發(fā)現(xiàn)了，并且有研究表明該蛋與并決定了產(chǎn)物松脂醇的構(gòu)型，因此松柏醇向松脂醇的轉(zhuǎn)化非常關(guān)鍵。但與松脂醇酶及其編碼基因相關(guān)的研究目前還非常少。

貴州大學(xué) 2017 屆 碩士研究生畢業(yè)論文移酶（the uridine diphosphate(UDP)-sugar dependent glycosyltransferases，UGT）催化生成木脂素糖苷。與 UDP-依賴的糖基轉(zhuǎn)移酶相關(guān)的研究比較晚，直到 2008 年以后，才從芝麻、亞麻、杜仲(李永捷等，2014)等植物中克隆得到了木脂素糖基轉(zhuǎn)移酶基因和編碼酶。Zhang 等(2015)指出松脂醇二葡糖苷可能的合成途徑：松脂醇在 UDP-依賴的糖基轉(zhuǎn)移酶的作用下形成松脂醇二葡糖苷(圖 1.3)。芝麻中的 UGT71A9 、UGT94D1 (Noguchi etal., 2008)、連翹中的 UGT71A18 (Ono et al. 2010)、亞麻中的 UGT74S1 (Ghose et al. 2014)等均已證明其參與到木脂素的糖基化途徑中。在亞麻的細(xì)胞懸浮培養(yǎng)液當(dāng)中，研究者已經(jīng)檢測到了鬼臼毒素 7-O-糖基化和 6-O-甲基化活性酶(Berim et al. 2008)，但其編碼基因還沒有從植物當(dāng)中克隆得到。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]天然木脂素的代謝工程和合成生物學(xué)研究進展[J]. 劉津,于思禮,馬雅婷,張鐵軍,趙廣榮.  中草藥. 2016(14)
[2]杜仲黃酮對小鼠淋巴細(xì)胞增殖及IL-2和IFN-γ誘生的影響[J]. 王志宏,雷明盛,彭勝,鄭陽,史麗娟,彭密軍.  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2016(04)
[3]杜仲的化學(xué)成分及藥理作用研究進展[J]. 馮晗,周宏灝,歐陽冬生.  中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué). 2015(06)
[4]鹽制對杜仲治療去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥影響的研究[J]. 翁澤斌,顏翠萍,吳育,蔡寶昌,陳志鵬,李偉東.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2014(12)
[5]杜仲雄花中三萜類化學(xué)成分研究[J]. 丁艷霞,王騰宇,張耀文,黃玉梅,馬琳,李冬冬,竇德強,李欽.  中國中藥雜志. 2014(21)
[6]杜仲葉樹脂分離純化產(chǎn)物的抗疲勞功效[J]. 劉迪,尚華,宋曉宇.  食品科學(xué). 2013(05)
[7]不同采收時間及干燥方法對杜仲葉中綠原酸含量的影響[J]. 何希瑞,李永生,楊芳,姚宏,常育,李倩.  西北藥學(xué)雜志. 2013(02)
[8]杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的測定[J]. 周修騰,何偉,李勇,顏慷祺.  中成藥. 2013(01)
[9]咖啡酸對破骨細(xì)胞形成及組織蛋白酶K基因表達的抑制[J]. 唐全勇,賈志宇,趙云轉(zhuǎn),陳彪,張睿,楊威,張英懷.  中國組織工程研究. 2012(46)
[10]基于GIS的貴陽蔬菜栽培氣候條件分析及布局研究[J]. 汪圣洪,趙仕慧.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(29)

碩士論文
[1]杜仲的化學(xué)成分研究[D]. 姚麗娜.天津大學(xué) 2010



本文編號：3402908