枸杞（Lycium）為茄科植物,西北地區(qū)常見的枸杞有三種:寧夏枸杞（Lycium barbarum vr）、黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）、北方枸杞（Lycium chinense Mill.vr）。其中,黑果枸杞因其花青素含量豐富,寧夏枸杞因其多糖含量高保健效果好深受人們的喜愛。然而,隨著黑果枸杞野生資源急劇降低以及人們對寧夏枸杞保健價值要求的提高,枸杞細胞工程研究的開展成為一件有重要意義的事情。本研究以青藏高原地區(qū)的野生黑果枸杞及人工栽培的寧夏枸杞為材料,在建立起組織培養(yǎng)再生體系的基礎上,對其進行原生質(zhì)體的游離與培養(yǎng)研究,為后續(xù)黑果枸杞和寧夏枸杞的體細胞雜交研究提供技術支撐。主要研究結果如下:1.以黑果枸杞的無菌苗葉片為外植體,建立了兩條器官再生途徑:一條是經(jīng)愈傷組織再分化的間接再生體系,一條是不經(jīng)愈傷組織再分化的直接再生體系。最佳愈傷組織誘導培養(yǎng)基為MS+1.5 mg·L^-1 2,4-D,誘導率達100%;最佳分化培養(yǎng)基為MS+1.5 mg·L^-1 6-BA+0.1 mg·L^-1 IBA... 

【文章來源】：青海大學青海省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

黑果枸杞的組織培養(yǎng)與離體再生EFG

252.2.2.2寧夏枸杞再生體系的建立同黑果枸杞愈傷組織誘導結果類似，6-BA的添加同樣不利于寧夏枸杞愈傷組織的誘導和生長，單獨添加0.5~1.5mg·L-1的2,4-D可以誘導出長勢較好的黃綠色、質(zhì)地松軟的愈傷組織（圖2.2A）。綜合誘導率及愈傷組織的生長態(tài)勢（表2.5），最佳愈傷組織誘導培養(yǎng)基為添加了0.5mg·L-12,4-D的一組，誘導率為83.3%。當誘導愈傷組織的培養(yǎng)基加入6-BA時，外植體僅表現(xiàn)為邊緣稍有膨脹，大部分表現(xiàn)出干黃狀態(tài)，沒有愈傷組織產(chǎn)生。圖2.2寧夏枸杞的組織培養(yǎng)與離體再生注：A:由葉片外植體誘導的愈傷組織B:繼代培養(yǎng)的愈傷組織C:愈傷組織分化出的不定芽D-E:葉片分化出的不定芽F:不定芽誘導生根G:移栽成活寧夏枸杞再生苗ABCDEFG

32處于快速生長期（18-27d）的愈傷組織細胞分裂旺盛，呈黃綠色，質(zhì)地松軟。（圖2.2B），選擇該時期的愈傷組織當做材料來源進行游離研究，效果更好。圖2.4寧夏枸杞愈傷組織的生長曲線Figure2.4GrowthcurveofLyciumbarbarumcallus2.3討論2.3.1植物生長調(diào)節(jié)劑對分化和脫分化的影響以枸杞葉片為外植體進行組織培養(yǎng)，多數(shù)報導都是通過間接器官發(fā)生途徑來建立再生體系，再生周期通常在三個月以上[114-115]。本研究通過對添加不同濃度6-BA和NAA的結果研究，完善并優(yōu)化了枸杞葉片的直接再生方法，減少了愈傷誘導步驟，將枸杞的再生周期縮短到兩個月左右，是一種更加快捷高效的再生體系。研究發(fā)現(xiàn)，單獨添加6-BA即可誘導不定芽的形成，且隨著6-BA濃度的升高，不定芽的誘導率和平均芽數(shù)降低，不定芽的長勢也越來越差，黑果枸杞和寧夏枸杞的葉片分化均有這種現(xiàn)象出現(xiàn)。類似的結果也存在于刨花潤楠（MachiluspauhoiKanehira）[116]和海倫兜蘭（PaphiopedilumhelenaeAver.）[117]不定芽的誘導中。往含有6-BA的培養(yǎng)基中添加一定量的NAA可以提高枸杞葉片產(chǎn)生的不定芽數(shù)，這一現(xiàn)象與Prakash和Staden[118]在研究Searsiadentata的再生時得出的結果相吻合。NAA與6-BA的組合有利于芽形態(tài)的建成，可促進芽

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本文編號：3402998