甘薯（Ipomoea batatas）是世界上重要的糧食、飼料、蔬菜、工業(yè)原料和新型能源作物。提高甘薯產(chǎn)量已成為當前甘薯育種的主要方向之一。MADS-box蛋白是一類重要的轉錄因子,在植物生長發(fā)育及抗逆等過程發(fā)揮著重要功能。我們利用轉錄組數(shù)據(jù)及甘薯近緣野生種I.trifida全基因組數(shù)據(jù)在甘薯（Xu22）中篩選并克隆到8個MADS-box基因;利用實時定量RT-PCR對其在甘薯各組織的表達特性進行了分析;對甘薯幼苗進行了非生物脅迫和激素處理,利用實時定量RT-PCR分析了8個MADS-box基因對非生物脅迫和激素的響應,篩選到一個可能與甘薯塊根發(fā)育和抗逆相關的MADS-box基因Ib MBP4,利用農桿菌轉化法在番茄中異源超表達了該基因,初步分析了Ib MBP4的功能。主要研究結果如下:（1）通過轉錄組數(shù)據(jù)及I.trifida全基因組數(shù)據(jù)庫篩選到8個MADS-box基因,以甘薯栽培種徐薯22葉、莖、根混合c DNA為模板,克隆了8個MADS-box基因。（2）通過生物信息學分析了8個MADS-box蛋白的基本理化性質。對各MADS-box基因進行了亞細胞定位預測,發(fā)現(xiàn)這8個基因都定位于... 

【文章來源】：江蘇師范大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：127 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

甘薯各組織總RNA電泳圖

江蘇師范大學碩士學位論文20表2-4各組織RNA的濃度測定Table2-4DeterminationoftheconcentrationofRNAsineachtissue材料名稱（中文）英文縮寫濃度（ng/μL）260/280葉L937.81.99莖S541.61.84纖維根FR640.31.88發(fā)育根1DR1322.11.89發(fā)育根2DR2307.41.86成熟根MR370.11.92從以上結果我們可以看出，所提取RNA的質量良好，28S和18S條帶較亮，5s條帶明顯，且亮度較弱，并且濃度較高，可用于后續(xù)反轉錄實驗。2.3.2MADS-box基因的擴增根據(jù)已有的轉錄組數(shù)據(jù)，結合公布的I.trifida全基因組數(shù)據(jù)庫，應用引物設計軟件PrimerPremier5，設計得到8對MADS-box引物，以之前反轉錄所得徐22各組織（葉、莖、纖維根、發(fā)育根初期、發(fā)育根后期和成熟塊根）混合cDNA為模板，分別對8個MADS-box基因進行了克攏如圖2-2、2-3和2-4所示，所擴增條帶大小與理論片段長度一致（IbMBP1：450bp，IbMBP2：666bp，IbMBP4：1036bp，IbMBP5：774bp，IbMBP6：648bp，IbMBP7：696bp，IbMBP8：636bp，IbMBP10：597bp），可以用于后續(xù)實驗。圖2-2MADS-box基因PCR電泳圖Figure2-2ThePCRelectrophoresisofMADS-boxgenesM:DL2000Marker，1：IbMBP1，2：IbMBP2，3：IbMBP6，4：IbMBP7，5：IbMBP8，6：IbMBP10M:DL2000Marker,1:IbMBP1,2:IbMBP2,3:IbMBP6,4:IbMBP7,5:IbMBP8,6:IbMBP10

第二章甘薯MADS-box基因的篩選及克隆21圖2-3IbMBP4基因PCR電泳圖Figure2-3ThePCRelectrophoresisofIbMBP4geneM:DL2000Marker，1~5：IbMBP4基因M:DL2000Marker,1~5:IbMBP4gene圖2-4IbMBP5基因PCR電泳圖Figure2-4ThePCRelectrophoresisofIbMBP5geneM:DL2000Marker，1：IbMBP5基因M:DL2000Marker,1:IbMBP5gene2.3.3陽性單克隆的篩選將PCR所得條帶經(jīng)過純化加A尾后，與克隆載體pMD19-T連接，轉入大腸桿菌感受態(tài)細胞后，利用菌落PCR對長出的單菌落進行陽性鑒定。如圖2-5至2-11所示，篩選獲得7個IbMBP1陽性克壟7個IbMBP2陽性克壟10個IbMBP4陽性克壟8個IbMBP5陽性克壟3個IbMBP6陽性克壟6個IbMBP7陽性克壟7個IbMBP8陽性克隆和8個IbMBP10陽性克攏圖2-5IbMBP1基因菌落PCRFigure2-5ThebacteriaPCRofIbMBP1geneM:DL2000Marker，1~7：七個IbMBP1陽性克隆M:DL2000Marker,1~7:sevenIbMBP1positiveclones

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3374277