氮是植物組織和器官的重要組成成分,在植物的生長(zhǎng)發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。硝態(tài)氮為大多數(shù)植物主要的氮源,植物對(duì)NO₃^-的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)是通過硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白來完成的。NRT1.1、NRT1.2和NRT 1.7是NRT基因家族的重要成員,它們不僅參與植物對(duì)氮的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和再利用過程,還在植物對(duì)干旱等逆境響應(yīng)過程中發(fā)揮重要作用。羊草為我國(guó)北方草原的重要物種之一,因其長(zhǎng)期生活在干旱、寒冷、貧瘠環(huán)境下,蘊(yùn)含豐富的耐貧瘠、抗逆基因資源。因此從羊草中克隆上述基因,不僅為揭示羊草氮吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)的分子調(diào)控機(jī)理提供基礎(chǔ),還將對(duì)培育氮高效利用和抗逆植物提供重要支持。本試驗(yàn)以羊草吉生四號(hào)為材料,利用前期已獲得的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù),通過RT-PCR方法獲得羊草LcNRT 1.1、LcNRT 1.2和LcNRT 1.7三個(gè)基因的cDNA全長(zhǎng)序列。然后利用生物信息學(xué)相關(guān)軟件對(duì)LcNRT1.1、LcNRT1.2和LcNRT1.7進(jìn)行分析,預(yù)測(cè)各基因編碼蛋白的基本結(jié)構(gòu)、親疏水性和跨膜結(jié)構(gòu)域;研究分析了羊草LcNRT 1.1、LcNRT 1.2和LcNRT 1.7在羊草不同組織間、不同生長(zhǎng)時(shí)... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 植物氮素同化概述
        1.1.1 氮素植物生長(zhǎng)發(fā)育中的主要作用
        1.1.2 高等植物同化氮素的生理機(jī)制
        1.1.3 高等植物吸收氮素的分子機(jī)制
    1.2 高等植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白研究進(jìn)展
        1.2.1 硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族研究進(jìn)展
        1.2.2 硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)構(gòu)功能研究進(jìn)展
    1.3 氮素對(duì)羊草生長(zhǎng)發(fā)育研究進(jìn)展
        1.3.1 施氮對(duì)羊草光合作用的影響
        1.3.2 氮素對(duì)羊草營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的影響
        1.3.3 氮素對(duì)羊草生殖生長(zhǎng)的影響
        1.3.4 氮肥對(duì)羊草品質(zhì)的影響
    1.4 研究目的與意義
    1.5 研究?jī)?nèi)容
第二章 LcNRT1.1， LcNRT1.2， LcNRT1.7 全長(zhǎng)擴(kuò)增與生物信息學(xué)分析
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和載體
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 植物預(yù)處理
        2.2.2 總RNA提取
        2.2.3 c DNA第一鏈的合成
        2.2.4 羊草LcNRT1.1， LcNRT1.2， LcNRT1.7 基因克隆
        2.2.5 PCR產(chǎn)物回收純化與質(zhì)粒提取
        2.2.6 目的片段與載體的連接
        2.2.7 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        2.2.8 菌落PCR檢測(cè)
        2.2.9 基因生物信息學(xué)分析
    2.3 結(jié)果分析與討論
        2.3.1 總RNA提取與反轉(zhuǎn)錄檢測(cè)
        2.3.2 羊草NRT基因c DNA全長(zhǎng)
        2.3.3 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 核苷酸序列分析
        2.3.4 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 親、疏水性預(yù)測(cè)
        2.3.5 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.3.6 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 跨膜區(qū)預(yù)測(cè)
        2.3.7 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)
        2.3.8 LcNRT1.1、LcNRT1.2、LcNRT1.7 編碼蛋白質(zhì)序列同源性分析
        2.3.9 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建
        2.3.10 LcNRT1.1、LcNRT1.2 和LcNRT1.7 三級(jí)蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
    2.4 小結(jié)
第三章 羊草Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 的表達(dá)特性分析
    3.1 羊草不同生長(zhǎng)時(shí)期Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 表達(dá)變化
        3.1.1 材料
        3.1.2 實(shí)時(shí)熒光定量
        3.1.3 基因的普通PCR擴(kuò)增
        3.1.4 基因的熒光定量PCR分析
    3.2 晝夜節(jié)律對(duì)Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 表達(dá)的影響
        3.2.1 材料
        3.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量
    3.3 不同形態(tài)氮素梯度對(duì)Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 表達(dá)的影響
        3.3.1 材料
        3.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量
    3.4 不同氮素配比處理對(duì)Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 表達(dá)的影響
        3.4.1 材料
        3.4.2 實(shí)時(shí)熒光定量
    3.5 等銨減硝及等硝增銨對(duì)Lc NRT1.1、Lc NRT1.2、Lc NRT1.7 表達(dá)的影響
        3.5.1 材料
        3.5.2 實(shí)時(shí)熒光定量
    3.6 結(jié)果與分析
        3.6.1 羊草不同生長(zhǎng)時(shí)期Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 表達(dá)特性
        3.6.2 晝夜節(jié)律對(duì)Lc NRT1.1， Lc NRT1.2， Lc NRT1.7 表達(dá)的影響
        3.6.3 不同形態(tài)氮素梯度對(duì)羊草根系中Lc NRT1.1 和Lc NRT1.7 表達(dá)的影響
        3.6.4 不同銨硝配比處理對(duì)羊草根系中Lc NRT1.1 和Lc NRT1.7 表達(dá)的影響
        3.6.5 等銨減硝對(duì)羊草根系中 LcNRT1.1 和 LcNRT1.7 表達(dá)的影響
        3.6.6 等硝增銨對(duì)羊草根系中Lc NRT1.1 和Lc NRT1.7 表達(dá)的影響
    3.7 討論
    3.8 小結(jié)
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]施氮對(duì)羊草個(gè)體特征、群體結(jié)構(gòu)及生產(chǎn)力的影響[D]. 西曉霞.東北師范大學(xué) 2018
[2]長(zhǎng)期過度放牧致羊草個(gè)體“矮小化”的調(diào)控機(jī)制[D]. 胡寧寧.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017
[3]菜心硝轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因NRTs的克隆及其表達(dá)特性分析[D]. 張躍朋.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[4]人工羊草地水肥效應(yīng)研究[D]. 蘇富源.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[5]不結(jié)球白菜NRT2基因的表達(dá)模式分析及其家族分子進(jìn)化研究[D]. 孔敏.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
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本文編號(hào)：3161267