5-甲基胞嘧啶DNA糖基化酶的表達(dá)對大麥種子醇溶蛋白組成的影響
發(fā)布時間：2021-03-30 03:41
大麥（Hordeum vulgare,2n=14）,自花授粉,禾本科、大麥屬,是我國主要種植作物之一。與小麥的營養(yǎng)成分近似,但谷蛋白含量較少,β-葡聚糖和可溶性纖維含量略高,在我國主要分布在長江流域、黃河流域和青藏高原。大麥籽粒醇溶蛋白作為種子胚乳中主要的貯藏蛋白質(zhì)之一,其含量不僅對啤酒釀造、飼料加工產(chǎn)生一定的影響,甚至也能成為乳糜瀉疾病的重要抗原來源。本研究選用三個國外品種:來自美國的Steptoe和Morex以及來自澳大利亞的Clipper作為實驗材料。利用大麥醇溶蛋白啟動子區(qū)域具有不同的甲基化機(jī)制差異,構(gòu)建5-甲基胞嘧啶DNA糖基化酶（DME）的沉默子,并轉(zhuǎn)化大麥,主要得到以下結(jié)論:1.以大麥Morex品種為材料,擴(kuò)增高分子量醇溶蛋白（D-hordein）的啟動子Hor3-1,通過使用不同保真性能的酶,最終確定有4個堿基差異的位點是由品種特異性造成的。之后,對得到的序列進(jìn)行CpG島的預(yù)測,得出該序列的GC頻率介于0.41.2之間,絕大部分位點高于閾值0.6,而CpG島的GC含量介于40%50%,低于顯著水平。通過對順式調(diào)控元件的預(yù)測得出...
【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：59 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
經(jīng)典位點特異性DNA維持甲基化模型的示意圖(JeltschAandJurkowskaRZ2014)
第一章 文獻(xiàn)綜述 基化的基因轉(zhuǎn)化細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)它們的轉(zhuǎn)錄是失活的 (S rensen M B et al. 1996)。rensen 等人 (1992) 通過基因組測序顯示，lys3a 可能在大麥胚乳的早期分化作用，因為通過對 B 組分啟動子的檢測，缺少或抑制相關(guān)基因啟動子與反相互作用的特定位點不能引起甲基化差異。雖然胚乳 Z 蛋白的基因啟動子和白啟動子的序列幾乎沒有同源性，但 lys3a 突變體中它們的 mRNA 水平都發(fā)明 Lys3 基因產(chǎn)物參與在轉(zhuǎn)錄激活之前。因此可以假設(shè)，大麥醇溶蛋白基因中的甲基化導(dǎo)致其維持在無活性狀態(tài)，這種無活性狀態(tài)可能形成無轉(zhuǎn)錄活性然后通過去甲基化過程，Lys3 產(chǎn)物將基因從無活性染色質(zhì)構(gòu)象轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚匀緩亩鴮?dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄得以實現(xiàn)。實際上，通過用 5-氮雜胞苷處理似乎可以將染與核酸酶結(jié)合更敏感的構(gòu)象，同時轉(zhuǎn)錄的激活也依賴于有反式作用因子的存
1-4 植物中幾種小 RNA 介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因沉默路徑的對比 (Wesley S V et al. 200.1-4 Comparison of several small RNA-mediated transgene silencing pathways in p非編碼基因轉(zhuǎn)錄后，通過 DCL1 處理成 21 個核苷酸的 miRNA。DCL2，DCL3 和 DCL4 分pRNAi，VIGS) 或由 RDR 家族的成員從 ssRNA 產(chǎn)生的長 dsRNA(共抑制，VIGS) 加工成 siRNA。21 個核苷酸的 siRNA 和 miRNA 指導(dǎo) AGO1 切割靶轉(zhuǎn)錄物，而 24 個核苷酸的 siRN修飾。每個 DCL 蛋白與特異性 dsRNA 結(jié)合蛋白 DRB (DCL1 的 HYL1，其他未顯示) 相互re transcribed from non-coding genes and processed by DCL1 to 21-nucleotide miRNAs. Long dd repeat constructs (hpRNAi, VIGS) or generated from ssRNA by a member of the RDR family (rocessed by DCL2, DCL3 or DCL4 to 22-, 24- or 21-nucleotide siRNAs, respectively. 21-nucls guide cleavage of target transcripts by AGO1, while 24-nucleotide siRNAs guide A modification. Each DCL protein interacts with a specific dsRNA binding protein, DRB (HYown).遺傳轉(zhuǎn)化應(yīng)用葉植物包括大量的農(nóng)業(yè)重要作物，如玉米、小麥、水稻和大麥等，通良這些作物的農(nóng)藝性狀已成為研究的熱點之一。將外源基因片段通過主基因組并穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)已經(jīng)日益多樣化，這種技術(shù)的不斷
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]我國大麥價格波動特征及其影響因素分析[J]. 賈小玲,孫致陸,李先德. 中國農(nóng)業(yè)資源與區(qū)劃. 2018(01)
[2]RNAi技術(shù)在作物中的應(yīng)用及安全評價研究[J]. 焦悅,付偉,翟勇. 作物雜志. 2018(01)
[3]青稞B-hordein基因?qū)π←溍娣奂庸ぬ匦缘挠绊慬J]. 馬興芹,余水洋,龍海,梁俊俊,潘志芬,鄧光兵,余懋群. 麥類作物學(xué)報. 2014(06)
[4]利用RNAi技術(shù)沉默大麥B-Hordein基因的研究[J]. 李靜雯,張正英,李淑潔. 麥類作物學(xué)報. 2014(02)
[5]擬南芥的印記基因和印記表達(dá)調(diào)控[J]. 張紅宇,徐培洲,楊華,吳先軍. 遺傳. 2010(07)
[6]DNA去甲基化與基因激活過程[J]. 柯躍斌,夏菠,梁明嬋,梅樹江. 癌變.畸變.突變. 2010(02)
[7]植物Dof轉(zhuǎn)錄因子及其生物學(xué)功能[J]. 徐慧妮,王康,李昆志. 生物技術(shù)通報. 2010(01)
[8]生物信息學(xué)在基因組研究中的應(yīng)用[J]. 陳力學(xué). 國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊. 2003(06)
[9]RNA干涉與基因沉默[J]. 湯富酬,薛友紡. 遺傳. 2001(02)
博士論文
[1]類大麥屬物種種子貯藏蛋白基因的分子克隆[D]. 郭志富.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[2]青稞B組醇溶蛋白基因與上游調(diào)控區(qū)的克隆及基因表達(dá)[D]. 韓兆雪.中國科學(xué)院研究生院（成都生物研究所） 2007
碩士論文
[1]以色列野生大麥自然群體與世界不同國家栽培大麥品種的遺傳多樣性分析[D]. 高永鋼.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010
[2]釀造大麥醇溶蛋白生化特性研究[D]. 徐凱.大連工業(yè)大學(xué) 2008
本文編號：3108789
【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：59 頁
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【部分圖文】：
經(jīng)典位點特異性DNA維持甲基化模型的示意圖(JeltschAandJurkowskaRZ2014)
第一章 文獻(xiàn)綜述 基化的基因轉(zhuǎn)化細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)它們的轉(zhuǎn)錄是失活的 (S rensen M B et al. 1996)。rensen 等人 (1992) 通過基因組測序顯示，lys3a 可能在大麥胚乳的早期分化作用，因為通過對 B 組分啟動子的檢測，缺少或抑制相關(guān)基因啟動子與反相互作用的特定位點不能引起甲基化差異。雖然胚乳 Z 蛋白的基因啟動子和白啟動子的序列幾乎沒有同源性，但 lys3a 突變體中它們的 mRNA 水平都發(fā)明 Lys3 基因產(chǎn)物參與在轉(zhuǎn)錄激活之前。因此可以假設(shè)，大麥醇溶蛋白基因中的甲基化導(dǎo)致其維持在無活性狀態(tài)，這種無活性狀態(tài)可能形成無轉(zhuǎn)錄活性然后通過去甲基化過程，Lys3 產(chǎn)物將基因從無活性染色質(zhì)構(gòu)象轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚匀緩亩鴮?dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄得以實現(xiàn)。實際上，通過用 5-氮雜胞苷處理似乎可以將染與核酸酶結(jié)合更敏感的構(gòu)象，同時轉(zhuǎn)錄的激活也依賴于有反式作用因子的存
1-4 植物中幾種小 RNA 介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因沉默路徑的對比 (Wesley S V et al. 200.1-4 Comparison of several small RNA-mediated transgene silencing pathways in p非編碼基因轉(zhuǎn)錄后，通過 DCL1 處理成 21 個核苷酸的 miRNA。DCL2，DCL3 和 DCL4 分pRNAi，VIGS) 或由 RDR 家族的成員從 ssRNA 產(chǎn)生的長 dsRNA(共抑制，VIGS) 加工成 siRNA。21 個核苷酸的 siRNA 和 miRNA 指導(dǎo) AGO1 切割靶轉(zhuǎn)錄物，而 24 個核苷酸的 siRN修飾。每個 DCL 蛋白與特異性 dsRNA 結(jié)合蛋白 DRB (DCL1 的 HYL1，其他未顯示) 相互re transcribed from non-coding genes and processed by DCL1 to 21-nucleotide miRNAs. Long dd repeat constructs (hpRNAi, VIGS) or generated from ssRNA by a member of the RDR family (rocessed by DCL2, DCL3 or DCL4 to 22-, 24- or 21-nucleotide siRNAs, respectively. 21-nucls guide cleavage of target transcripts by AGO1, while 24-nucleotide siRNAs guide A modification. Each DCL protein interacts with a specific dsRNA binding protein, DRB (HYown).遺傳轉(zhuǎn)化應(yīng)用葉植物包括大量的農(nóng)業(yè)重要作物，如玉米、小麥、水稻和大麥等，通良這些作物的農(nóng)藝性狀已成為研究的熱點之一。將外源基因片段通過主基因組并穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)已經(jīng)日益多樣化，這種技術(shù)的不斷
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]我國大麥價格波動特征及其影響因素分析[J]. 賈小玲,孫致陸,李先德. 中國農(nóng)業(yè)資源與區(qū)劃. 2018(01)
[2]RNAi技術(shù)在作物中的應(yīng)用及安全評價研究[J]. 焦悅,付偉,翟勇. 作物雜志. 2018(01)
[3]青稞B-hordein基因?qū)π←溍娣奂庸ぬ匦缘挠绊慬J]. 馬興芹,余水洋,龍海,梁俊俊,潘志芬,鄧光兵,余懋群. 麥類作物學(xué)報. 2014(06)
[4]利用RNAi技術(shù)沉默大麥B-Hordein基因的研究[J]. 李靜雯,張正英,李淑潔. 麥類作物學(xué)報. 2014(02)
[5]擬南芥的印記基因和印記表達(dá)調(diào)控[J]. 張紅宇,徐培洲,楊華,吳先軍. 遺傳. 2010(07)
[6]DNA去甲基化與基因激活過程[J]. 柯躍斌,夏菠,梁明嬋,梅樹江. 癌變.畸變.突變. 2010(02)
[7]植物Dof轉(zhuǎn)錄因子及其生物學(xué)功能[J]. 徐慧妮,王康,李昆志. 生物技術(shù)通報. 2010(01)
[8]生物信息學(xué)在基因組研究中的應(yīng)用[J]. 陳力學(xué). 國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊. 2003(06)
[9]RNA干涉與基因沉默[J]. 湯富酬,薛友紡. 遺傳. 2001(02)
博士論文
[1]類大麥屬物種種子貯藏蛋白基因的分子克隆[D]. 郭志富.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[2]青稞B組醇溶蛋白基因與上游調(diào)控區(qū)的克隆及基因表達(dá)[D]. 韓兆雪.中國科學(xué)院研究生院（成都生物研究所） 2007
碩士論文
[1]以色列野生大麥自然群體與世界不同國家栽培大麥品種的遺傳多樣性分析[D]. 高永鋼.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010
[2]釀造大麥醇溶蛋白生化特性研究[D]. 徐凱.大連工業(yè)大學(xué) 2008
本文編號：3108789
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