棉花優(yōu)良品種是保證棉花優(yōu)質、高產(chǎn)、可持續(xù)發(fā)展的關鍵性因素,而品種真實性和純度是種子質量的重要指標,對作物產(chǎn)量及品質具有直接的影響。隨著品種數(shù)量的增多,田間表型農(nóng)藝性狀鑒定方法已難以滿足快速、準確鑒定品種質量的需求。隨著分子標記技術的發(fā)展,分子標記檢測技術可以滿足農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中不同條件下品種鑒定的需要。本研究以SSR標記技術為基礎,結合種子監(jiān)管工作實際,通過創(chuàng)新DNA快速提取方法、確定用于分子檢測的核心SSR引物、明確電泳檢測技術平臺、確定棉花品種純度和真實性鑒定方法建立一套簡便、經(jīng)濟、準確而高效的棉花品種分子標記鑒定技術體系。該技術體系對保證棉花種子質量安全具有重要意義。主要研究結果如下:1、通過SSR引物多態(tài)性篩選確定了26對用于棉花品種分子檢測的核心SSR引物。核心SSR引物覆蓋棉花26條染色體,每對引物擴增的譜帶帶型數(shù)目最少為3種,最多11種,平均每對引物5.62種。2、通過比較變性PAGE和非變性PAGE兩種銀染檢測方法,發(fā)現(xiàn)變性PAGE銀染檢測法能檢測出分子標記位點真實的等位變異,而且條帶清晰,結果可靠,適合用于對等位變異要求較高的檢測分析如品種真實性鑒定、個體親緣關系鑒定等;非... 

【文章來源】：山東師范大學山東省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

DNA溶解時間對PCR擴增產(chǎn)物的影響

圖 2-2 快速提取 DNA 濃度對 PCR 擴增產(chǎn)物的影響Fig. 2-2 The influence of DNA sample concentration for PCR amplification products注：1-4 表示 DNA 樣品稀釋 20 倍；5-8 表示 DNA 樣品稀釋 30 倍；9-12 表示 DNA 樣品稀釋35 倍；13-16 表示 DNA 樣品稀釋 40 倍；17-20 表示 DNA 樣品稀釋 45 倍；21-24 表示 DNA樣品稀釋 50 倍；25-28 表示 DNA 樣品稀釋 80 倍；29-32 表示 DNA 樣品稀釋 100 倍。Note: No.1-4 represents the 20 times dilution DNA sample; No.5-8 represents the 30 timesdilution DNA sample; No.9-12 represents the 35 times dilution DNA sample; No.13-16represents the 40 times dilution DNA sample; No.17-20 represents the 45 times dilution DNAsample; No.21-24 represents the 50 times dilution DNA sample; No.25-28 represents the 80times dilution DNA sample; No.29-32 represents the 100 times dilution DNA sample;2.2 確定分子標記檢測的核心 SSR 引物（1） SSR 核心引物的初步確定： 本研究所用的 SSR 引物源自

對 SSR 引物進行 PCR 擴增，通過 6%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析擴增結果(圖 2-3)。依據(jù)帶型清晰、擴增穩(wěn)定、多態(tài)性豐富而且每條染色體確定 2 對引物的原則初步確定基本覆蓋全部基因組的 52 對核心引物（表 2-3），這些 SSR 引物中有 18 對引物可以鑒定兩種基因型，19 對引物可以鑒定三種基因型，8 對引物可以鑒定四種基因型，7 對引物可以鑒定五種以上的基因型。（2） SSR 核心引物的再確定：利用 96 個棉花品種對 52 對初步確定的 SSR 引物進行 PCR 擴增，通過 8%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析擴增結果。依據(jù)帶型清晰、擴增穩(wěn)定、等位變異豐富而且每條染色體確定 1 對引物的原則最終確定了代表全部基因組的 26 對核心引物（表 2-4）。


本文編號：3100552