紫色小麥作為一種特殊的種質(zhì)資源,其果皮中含有大量的花青素,花青素在保健、醫(yī)療、食品等各方面都起到重要作用,但是參與花青素生物合成的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)是十分復(fù)雜的,其中不止有花青素相關(guān)基因的參與,植物激素的一些相關(guān)基因也可能參與花青素的調(diào)控,因此,研究這些基因在花青素合成中起到的作用是非常必要的。本研究的主要研究對象為貴紫麥1號小麥,對花青素合成相關(guān)基因在貴紫麥1號和中國春不同時期的表達量進行分析;測定了在貴紫麥不同時期（10dpa、25dpa、35dpa）的生長素和細胞分裂素的含量,以及貴紫麥1號籽�；ㄇ嗨胤e累過程中抗氧化酶的含量;根據(jù)前期的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),對生長素和細胞分裂素相關(guān)基因的表達熱圖進行了分析,并利用q RT-PCR技術(shù)對相關(guān)基因進行驗證;克隆GzANS-6D基因并轉(zhuǎn)化煙草,對其功能進行初步鑒定。1.本研究檢測了8個花青素相關(guān)基因（GzMYB-7D1和GzMYC-2A1屬于花青素調(diào)控基因,GzCHI-5D、GzANS、GzCHS、GzPAL-6D1-T2、GzDFR-3B-T1和GzF3H-2D屬于結(jié)構(gòu)基因）在貴紫麥1號和中國春不同時期（10dpa、25dpa、35dpa）的表達情況。q... 

【文章來源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1.前言
    1.1 花青素的生物合成
        1.1.1 花青素的結(jié)構(gòu)與功能
        1.1.2 花青素生物合成的基本途徑
        1.1.3 參與花青素生物合成途徑的相關(guān)基因
    1.2 紫粒小麥的研究進展
        1.2.1 紫粒小麥中的花青素積累變化
        1.2.2 紫粒小麥花青素合成調(diào)控基因的表達研究
        1.2.3 紫色小麥花青素合成結(jié)構(gòu)基因的表達研究
        1.2.4 花青素合成酶基因（ANS）的研究進展
    1.3 植物生長調(diào)節(jié)劑調(diào)控花青素的合成
    1.4 花青素的抗氧化活性
    1.5 本研究的目的及意義
2.貴紫麥1號花青素合成相關(guān)基因的表達分析與初步鑒定
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 試劑盒及化學(xué)試劑
        2.1.3 載體、菌株及工具酶
        2.1.4 培養(yǎng)基
    2.2 實驗器材
    2.3 實驗方法
        2.3.1 植物材料的培養(yǎng)
        2.3.2 花青素含量的提取和測定
        2.3.3 抗氧化酶活性測定
        2.3.4 植物激素的含量測定
        2.3.5 總RNA的提取、質(zhì)量檢測及cDNA鏈的合成
        2.3.6 實時熒光定量PCR（Quantitative real-time PCR,q RT-PCR）分析
        2.3.7 GzANS-6D基因的克隆及過表達載體的構(gòu)建
            2.3.7.1 GzANS-6D基因的PCR擴增
            2.3.7.2 目的片段的回收
            2.3.7.3 帶酶切位點GzANS-6D與克隆載體的連接和轉(zhuǎn)化
            2.3.7.4 質(zhì)粒的提取
            2.3.7.5 構(gòu)建p BI121-GzANS-6D過表達載體
        2.3.8 生物信息學(xué)分析
        2.3.9 轉(zhuǎn)基因煙草的獲取
            2.3.9.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)農(nóng)桿菌LBA4404感受態(tài)細胞
            2.3.9.2 陽性克隆的鑒定
            2.3.9.3 農(nóng)桿菌的培養(yǎng)及活化
            2.3.9.4 葉盤法轉(zhuǎn)化煙草植株
            2.3.9.5 轉(zhuǎn)基因煙草植株DNA的提取
            2.3.9.6 PCR鑒定陽性轉(zhuǎn)基因煙草植株
        2.3.10 相關(guān)基因的表達分析
        2.3.11 數(shù)據(jù)分析
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 貴紫麥1號籽粒在發(fā)育過程中的表型和花青素積累
        2.4.2 貴紫麥1號籽�；ㄇ嗨胤e累過程中生長素和細胞分裂素的含量變化
        2.4.3 貴紫麥1號籽粒花青素積累過程中抗氧化酶的含量變化
        2.4.4 花青素相關(guān)基因在中國春和GZ1 籽粒不同發(fā)育時期的q RT-PCR分析
        2.4.5 不同發(fā)育時期花青素合成過程中生長素和細胞分裂素相關(guān)基因的表達熱圖
        2.4.6 花青素積累過程中生長素和細胞分裂素途徑基因的q RT-PCR分析
        2.4.7 GzANS-6D基因的克隆及過表達載體的構(gòu)建
        2.4.8 GzANS-6D基因的序列分析
        2.4.9 貴紫麥1號GzANS-6D的氨基酸序列比對及系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.4.10 轉(zhuǎn)GzANS-6D基因煙草的鑒定
        2.4.11 GzANS-6D過表達及相關(guān)基因的表達分析
    2.5 討論
        2.5.1 花青素合成相關(guān)基因在貴紫麥1號中的RT-PCR分析
        2.5.2 生長素和細胞分裂素在花青素積累中的作用
        2.5.3 貴紫麥1 號中花青素合成酶基因GzANS-6D的初步鑒定
3.總結(jié)與展望
    3.1 本研究獲得的主要結(jié)論
    3.2 存在的問題及展望
致謝
參考文獻
附錄一
附錄二 進化樹構(gòu)建所需的相關(guān)蛋白



本文編號：3093249