發(fā)布時(shí)間：2021-03-20 10:33

　　冬小麥（Triticum aestivum L.）品種東農(nóng)冬麥1號(hào)（Dongnongdongmai 1,Dn1）、東農(nóng)冬麥2號(hào)（Dongnongdongmai 2,Dn2）是在黑龍江省能夠安全越冬的強(qiáng)抗寒品種,對(duì)其開展抗寒研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。濟(jì)麥22（J22）具有較強(qiáng)的抗寒能力,但不能在黑龍江省越冬。脫落酸（ABA）在植物非生物脅迫過程中發(fā)揮重要作用。本研究以這三種冬小麥為試驗(yàn)材料,挑選與抗逆相關(guān)的bZIP家族中的3個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因（TabZIP2、TabZIPD和TabZIP-like）,在大田自然降溫（5℃、0℃、-10℃、-25℃）條件下,探究其轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)是否受ABA及低溫誘導(dǎo)調(diào)控。通過定量方法,測(cè)定3個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因在低溫下的相對(duì)表達(dá)水平,從中篩選低溫下ABA相關(guān)性變化倍數(shù)較大的轉(zhuǎn)錄因子并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測(cè)分析,同時(shí),克隆并構(gòu)建TabZIP2的過表達(dá)載體,瞬時(shí)表達(dá)到煙草葉片中對(duì)TabZIP2表達(dá)進(jìn)行分析,進(jìn)而補(bǔ)充完善轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控冬小麥抗寒的機(jī)制。研究結(jié)果如下:（1）在5℃、0℃、-10℃、-25℃（大田自然降溫）時(shí)取樣,對(duì)其3個(gè)轉(zhuǎn)錄因子（TabZIP2、TabZIPD和T... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

逆境脅迫與基因表達(dá)之間細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑[59]

低溫相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（TabZIP2、TabZIPD 和 TabZIP-like）引因 TabZIP2、TabZIPD、TabZIP-like 和 TaActin 引物序列如表 3-1 所示：表 3-1 定量引物序列Tab. 3-1 Sequences of primers used in Real-time PCR稱 上游引物 下游引物P2 AAACGTGCTGTCCAACAATATG CCACAGGAGAGGGAAAGAACCPD CCTCCGCTGGATCAACTACC TCCTCCTGATGTGCGTGTTCP-like GTGTTGTTGTCGTTGTCGTATTTC GCCTTGGTATTGCGTGTAAGCn CCTTAGTACCTTCCAACAGATGT CCAGACAACTCGCAACTTAGADn1 分蘗節(jié)和葉片 RNA 的提取 Dn1 不同溫度（5℃、0℃、-10℃和-25℃）下取樣的分蘗節(jié)和葉片中進(jìn)行總 R用超微量紫外分光光度計(jì)檢測(cè)其濃度，數(shù)據(jù)顯示 RNA 純度較高，可用于后續(xù)度下 RNA 進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，來對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，如圖 3-1 所示，均獲明質(zhì)量良好。Dn2 和 J22 同 Dn1。

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)工程碩士學(xué)位論文3.1.3 定量基因引物特異性檢測(cè)對(duì)四個(gè)溫度條件下（5℃、0℃、-10℃、-25℃）提取的 RNA 反轉(zhuǎn)錄為 cDNA，以 cDN為模板，對(duì) 3 個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因的引物進(jìn)行特異性檢測(cè)。如圖 3-2（從左到右依次為 TabZIPTabZIPD、TabZIP-like），PCR 膠圖顯示為條帶單一，亮度清晰，無拖尾現(xiàn)象，證明該引物定量程序能準(zhǔn)確的體現(xiàn)相關(guān)基因的表達(dá)量變化，可用于后續(xù)實(shí)時(shí)定量實(shí)驗(yàn)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]冬小麥抗寒lncRNA篩選及與tae-miR398應(yīng)答低溫脅迫的互作研究[D]. 盧秋巍.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]低溫下ABA調(diào)控冬小麥糖代謝及抗寒基因表達(dá)的研究[D]. 劉麗杰.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]東農(nóng)冬麥1號(hào)越冬期間的microRNA高通量測(cè)序及生物信息學(xué)分析[D]. 盧寶偉.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012

碩士論文
[1]ABA調(diào)控冬小麥抗寒相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)模式的分析及功能探究[D]. 呂巖.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]冬小麥miR5049-3p和miR1120a分別與其靶基因6PGL和FBA互作響應(yīng)低溫脅迫的分子機(jī)制[D]. 彭瞰看.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]低溫馴化及ABA對(duì)冬小麥葉綠素?zé)晒馓匦院涂寡趸富钚缘挠绊慬D]. 王秀田.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[4]東農(nóng)冬麥1號(hào)響應(yīng)低溫脅迫的比較代謝組學(xué)研究[D]. 包雨卓.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[5]水楊酸處理對(duì)低溫脅迫下冬小麥蔗糖代謝的影響[D]. 吳冰.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[6]外源水楊酸提高小麥抗寒性的應(yīng)用研究[D]. 李速.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[7]水稻轉(zhuǎn)錄因子OsbZIP2的初步研究[D]. 代繼松.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[8]旱澇—低溫交叉脅迫對(duì)小麥抗寒性的影響[D]. 李懷偉.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[9]幾種常綠闊葉植物抗寒性研究[D]. 邵文鵬.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[10]黃瓜耐冷指標(biāo)的篩選及Ca～（2+）在黃瓜耐冷中作用的研究[D]. 李曉明.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3090857