流式細(xì)胞術(shù)是20世紀(jì)中期迅速發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)快速分析和分選的技術(shù)。它將液流技術(shù)、光學(xué)技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)以及電子技術(shù)集于一體,完成對(duì)懸浮粒子的準(zhǔn)確分析和分選。20世紀(jì)80年代這項(xiàng)技術(shù)開始在植物DNA含量、細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)基因以及次級(jí)代謝產(chǎn)物累積檢測(cè)等方面得到廣泛應(yīng)用。本文以不同細(xì)胞基因表達(dá)的差異化研究為出發(fā)點(diǎn),通過(guò)調(diào)整消化酶組份、消化時(shí)間、固定液的選取、懸浮液的制備、染料的選擇等,探索并初步建立了玉米根尖原生質(zhì)體的分離、流式分析、分選及核酸提取技術(shù)體系;同時(shí),還以五種不同類型的玉米淀粉為材料,成功進(jìn)行了不同來(lái)源淀粉的分析和分選,首次建立了淀粉的流式分選技術(shù)體系。取得的主要研究成果有:1.玉米根尖組織原生質(zhì)體的分離和流式分析首先運(yùn)用酶解法分離根尖組織原生質(zhì)體,然后再利用流式細(xì)胞儀對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行分析和分選,可得出以下結(jié)論:（1）玉米根尖組織在酶解液（含1.00%的纖維素酶及0.30%的離析酶,甘露醇濃度為13%,pH為5.8的CPW溶液）中酶解6h可以得到大量有活性的原生質(zhì)體。（2）利用25%的蔗糖溶液可實(shí)現(xiàn)對(duì)粗制原生質(zhì)體的純化。（3）根尖組織原生質(zhì)體需要Hoechst 33342在溫度為38℃,p... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同酶組合處Fig.2-1Theprotoplastqcombin

A1:0.60% cellulose+0.00% macerozyme; A2:1.00% cellulose+0.00% macerozyme; A3:1.40%cellulose+0.00% macerozyme; A4:1.80% cellulose+0.00% macerozyme; A5:2.20% cellulose+0.00%macerozyme; B1:0.60% cellulose+0.30% macerozyme; B2:1.00% cellulose+0.30% macerozyme;B3:1.40% cellulose+0.30% macerozyme; B4:1.80% cellulose+0.30% macerozyme; B5:2.20%cellulose+0.30% macerozyme; C1:0.60% cellulose+0.60% macerozyme; C2:1.00% cellulose+0.60%macerozyme; C3:1.40% cellulose+0.60% macerozyme; C4:1.80% cellulose+0.60% macerozyme;C5:2.20% cellulose+0.60% macerozyme; D1:0.60% cellulose+0.90% macerozyme; D2:1.00%cellulose+0.90% macerozyme; D3:1.40% cellulose+0.90% macerozyme; D4:1.80% cellulose+0.90%macerozyme; D5:2.20% cellulose+0.90% macerozyme;A1:0.60%纖維素酶+0.00%離析酶; A2:0.60%纖維素酶+0.30%離析酶; A3:0.60%纖維素酶+0.60%離;A4:0.60%纖維素酶+0.90%離析酶; B1:1.00%纖維素酶+0.00%離析酶; B2:1.00%纖維素酶+0.30%酶; B3:1.00%纖維素酶+0.60%離析酶; B4:1.00%纖維素酶+0.90%離析酶; C1:1.40%纖維素酶+0.0離析酶; C2:1.40%纖維素酶+0.30%離析酶; C31.40%纖維素酶+0.60%離析酶; C4:1.40%纖維素酶+0.90%離析酶; D1:1.80%纖維素酶+0.00%離析酶; D2:1.80%纖維素酶+0.30%離析酶; D3:1.80%纖維素酶+0.60%離析酶; D4:1.80%纖維素酶+0.90%離析酶; E1:2.20%纖維素酶+0.00%離析酶; E2:12.20圖 2-2 不同酶濃度處理下得到的原生質(zhì)體數(shù)量Fig.2-2 The protoplast quantity of different enzyme combination

易發(fā)生漲破現(xiàn)象；而滲透壓過(guò)高時(shí)，原生質(zhì)體易失去水分原有產(chǎn)量和活性。材料和酶的特性，酶解消化時(shí)間對(duì)植物組織分離原生質(zhì)體有較大的間條件下，植物組織經(jīng)酶解得到較少數(shù)目的原生質(zhì)體；酶解時(shí)間過(guò)的活性。本實(shí)驗(yàn)以上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果配制酶解液，使用最佳酶處理組合最適 pH,置于在離心管中,加入根尖材料。在 30r/min，25±1℃黑暗條 2h 統(tǒng)計(jì)一次原生質(zhì)體數(shù)量和活性比例，直至 10h。如圖 2-3 所示，當(dāng)酶解時(shí)間較短時(shí)，組織酶解不充分，最終得到的隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)，組織與酶解液有了充足的時(shí)間充分接觸，得多，酶解時(shí)間達(dá)到 6h 左右時(shí)，原生質(zhì)體產(chǎn)量達(dá)到最大值，表明此組織最佳的酶處理時(shí)間，平均每個(gè)計(jì)數(shù)格內(nèi)有 58 個(gè)原生質(zhì)體；若產(chǎn)物開始下降，可能原因是反應(yīng)體系中的成分長(zhǎng)時(shí)間與原生質(zhì)體接此外振蕩提供的動(dòng)力長(zhǎng)時(shí)間作用于去掉細(xì)胞壁的原生質(zhì)體，也會(huì)破于玉米根尖材料，最佳的酶解時(shí)間是 6h。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3071150