磷素是植物體內(nèi)非常重要的大量元素之一,其含量約占植物干重的0.2%。由于磷素是許多重要生物大分子的關(guān)鍵組分,且參與植物體內(nèi)許多的生理生化反應(yīng)中,因此植物的生長發(fā)育離不開磷元素。無機磷主要儲存在植物的液泡中。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)了兩個水稻液泡膜定位的甘油三磷酸轉(zhuǎn)運體（OsvGlpTl、OsvGlpT2）,這兩個轉(zhuǎn)運體蛋白負責將無機磷從液泡內(nèi)外排到細胞溶質(zhì)中。甘油三磷酸轉(zhuǎn)運體最早是在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn),定位在大腸桿菌質(zhì)膜上,而水稻中的這兩個轉(zhuǎn)運體,定位于液泡膜,并發(fā)揮著不同的底物特性。因此,本研究將解析水稻甘油三磷酸轉(zhuǎn)運體OsvGlpT1和OsvGlpT2的液泡膜定位機理。取得的主要研究結(jié)果如下:1.OsvGlpT1、OsvGlpT2的液泡膜定位途徑為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）-高爾基體（Golgi）-反式高爾基體（TGN）-液泡膜前體（PVC）-液泡膜（Tonoplast）。其中,位于第六和第七跨膜結(jié)構(gòu)域間親水環(huán)上的LL為這兩個蛋白的液泡膜定位信號,將其替換成AA后將導致蛋白錯誤地定位到細胞質(zhì)膜上;2.COPII復(fù)合體在膜蛋白由ER輸出到Golgi過程起著重要的作用,我們發(fā)現(xiàn)COPII復(fù)合體的亞基OsS... 

【文章來源】：浙江師范大學浙江省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．３?ＰＨＴ１蛋白運輸過程的調(diào)控模式??Ｆｉｇｕｒｅｌ．３?Ｍｕｌｔｉｐｌｅ?Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ?Ｅｖｅｎｔｓ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＰＨＴ１?Ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ??

于復(fù)合體受體蛋白?３?（ＡｄａｐｔｏｒＰｒｏｔｅｉｎ３，ＡＰ３）的?ＥＲ－Ｇｏｌｇｉ－Ｔｏｎｏｐｌａｓｔ?的運輸途??徑；３．不經(jīng)過Ｇｏｌｇｉ的從ＥＲ直接運輸?shù)剑裕铮睿铮穑欤幔螅舻耐緩�，其中第１和第�??種是最主要的液泡膜蛋白運輸途徑［５７’５８］。圖１．４是液泡膜定位蛋白的兩種輸出途??徑［５８］。??－．Ｑ．?〇．?ｔ＂＇?＾?ＰＭ??Ｉ?ＡＰ１?ａｄａｐｔｏｒ?ｃｏｍｐｌｅｘ???ＧＦｐ－ＶＩＴ１???ＴＲＩＳ，＾＾＾ＳＵＣ４??、?Ｇｏｌｇｉ?／?Ｖａｃｕｏｌｅ??＾?Ｓ（ＪＣ４?＼?ＡＰ３?ａｄａｐｔｏｒ?ｃｏｍｐｌｅｘ?ＳＵＣ４Ｊ??、、、、：：ｂ，丨??圖１．４擬南芥中液泡膜定位蛋白的兩種輸出途徑??Ｆｉｇｕｒｅ?１．４?Ｗｏｒｋｉｎｇ?Ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?Ｖａｃｕｏｌａｒ?Ｐｒｏｔｅｉｎｓ?Ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ?ｉｎ?Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ??１．５．１依賴于復(fù)合體ＡＰＩ的運輸途徑??在真核生物細胞中，ＣＯＰＩＩ復(fù)合體參與貨物蛋白從ＥＲ到Ｇｏｌｇｉ的運輸過??程［６１］。定位于液泡膜的分泌蛋白首先在ＥＲ合成，經(jīng)過折疊、裝載和翻譯后的??修飾，隨后蛋白進入ＣＯＰＩＩ囊泡中，由ＥＲ轉(zhuǎn)運到Ｇｏｌｇｉ［６２＇６３］。在釀酒酵母中，??ＣＯＰＩＩ囊泡的形成過程發(fā)生在整個ＥＲ中，但在大部分的真核生物細胞中，ＣＯＰ??ＩＩ囊泡調(diào)控的蛋白輸出過程主要在特殊的區(qū)域進行，該區(qū)域被稱為ＥＲ輸出位??點（ＥＲｅｘｉｔｓｉｔｅｓ

?濾?局懈視停攘姿嶙?頌宓囊號菽ざㄎ換?矸治觶崳?基端（Ｎ端）的結(jié)果（圖２．１）。將ＥＧＦＰ－ＯｓｖＧｌｐＴ融合基因和與ＲＦＰ融合的ＥＲ??定位的標記基因共同轉(zhuǎn)化水稻原生質(zhì)體，隨后對細胞進行觀察，我們可以看到，??其中定位在ＥＲ上的融合表達蛋白的紅色熒光信號主要分布在細胞的內(nèi)部，且圍??繞細胞核形成典型的環(huán)狀結(jié)構(gòu)（ＥＲ?ｒｉｎｇ），而綠色焚光蛋白ＧＦＰ信號在ＲＦＰ信??號內(nèi)，不與ＲＦＰ熒光信號重疊。這些結(jié)果表明ＯｓｖＧｌｐＴｌ和ＯｓｖＧｌｐＴ２都定位在??水稻原生質(zhì)體細胞液泡膜上。該原生質(zhì)體瞬時表達實驗重復(fù)兩次，且三次結(jié)果都??保持一致。??一?■■■??圖２．１水稻中ＯｓｖＧｌｐＴｌ和０ｓｖＧｌｐＴ２蛋白的亞細胞定位??水稻野生型原生質(zhì)體細胞中融合蛋白瞬時表達，ＯｓｖＧｌｐＴｌ和０ｓｖＧｌｐＴ２蛋白定位于液泡膜。??綠色焚光表示ＧＦＰ信號，紅色熒光表示ＥＲ?ｍａｒｋｅｒ的信號。標尺為７．５叫。??Ｆｉｇｕｒｅ２．１?Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ?Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＯｓｖＧｌｐＴｌ?ａｎｄ?０ｓｖＧｌｐＴ２??Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｆｕｓｉｏｎ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｗｉｌｄ?ｔｙｐｅ?ｒｉｃｅ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ


本文編號：2916744