發(fā)布時(shí)間：2020-11-17 02:35

　　 本研究以吉林省主栽品種‘大西洋’、‘春薯3號(hào)’、‘春薯5號(hào)’、‘吉薯1號(hào)’馬鈴薯脫毒試管苗為試驗(yàn)材料,主要開展以下兩方面研究工作。一是分別對(duì)四種馬鈴薯莖段再生體系進(jìn)行研究,并從植物激素選擇和使用濃度入手優(yōu)化馬鈴薯再生條件,以期建立馬鈴薯高效再生體系;二是利用獲得的再生體系將gus基因轉(zhuǎn)入‘春薯3號(hào)’馬鈴薯中,獲得‘春薯3號(hào)’馬鈴薯轉(zhuǎn)基因植株。試驗(yàn)最終建立了四種馬鈴薯的高效再生體系,并對(duì)‘春薯3號(hào)’外源基因遺傳轉(zhuǎn)化影響因素中的菌液濃度、侵染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行了優(yōu)化。主要研究結(jié)果如下:1)確定了‘大西洋’適合愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L2,4-D+0.4 mg/L KT,誘導(dǎo)率達(dá)100%;適合愈傷組織分化培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L KT+2.0 mg/L ZT,分化率達(dá)95%。2)確定了‘春薯3號(hào)’愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L2,4-D+0.4 mg/L KT,誘導(dǎo)率達(dá)100%;愈傷組織分化培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2mg/L KT+2.0 mg/L ZT,分化率達(dá)79.4%。3)確定了‘春薯5號(hào)’愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L2,4-D+0.4 mg/L KT,誘導(dǎo)率達(dá)100%;愈傷組織分化培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+3.0mg/L ZT+0.5 mg/L GA_3,分化率達(dá)68.75%。4)確定了‘吉薯1號(hào)’愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L2,4-D+0.4 mg/L KT,誘導(dǎo)率達(dá)100%;愈傷組織分化培養(yǎng)基為:MS+2.0 mg/L 6-BA+3.0mg/L ZT+0.5 mg/L GA_3,分化率達(dá)85.7%。5)通過對(duì)農(nóng)桿菌菌液濃度的分析、侵染時(shí)間的篩選、共培養(yǎng)時(shí)間的比較,確定了適合春薯3號(hào)的侵染條件:OD_(600)≈0.5,侵染時(shí)間為10min,共培養(yǎng)時(shí)間為3d。6)試驗(yàn)成功獲得了‘春薯3號(hào)’抗性植株,通過PCR檢測(cè)和gus染色證明外源基因已成功轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞中。通過上述研究,進(jìn)一步了解了馬鈴薯種質(zhì)基因型與其再生條件的關(guān)系,建立一套高效馬鈴薯植物再生體系,為吉林省地方馬鈴薯的栽培、種質(zhì)資源保存和遺傳育種提供了重要的參考。
【學(xué)位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S532
【部分圖文】：

與本試驗(yàn)結(jié)果相一致。誘導(dǎo)出的愈傷組織均在 S1 中分化出芽，C5 和 C9 中的莖段在 S1 中分化效果如圖2.1 所示。從 C1、C5、C6、C9 中轉(zhuǎn)出的莖段從接種到出芽結(jié)束分別用了 42d、33d、41d、40d，分化率分別為 80%、77.5%、85%和 95%。雖然 C5 和 S1 的組合用時(shí)最短，但 C9和 S1 的組合，分化率最高，為‘大西洋’理想的再生體系。圖 2.1‘大西洋’愈傷組織的誘導(dǎo)及分化A：C5 中愈傷組織的誘導(dǎo)；B：C9 中愈傷組織的誘導(dǎo)；C：C5 中的愈傷組織在 S1 中的分化；D：C9 中的愈傷組織在 S1 中的分化

圖 2.2‘春薯 3 號(hào)’愈傷組織的誘導(dǎo)及分化A：‘春薯 3 號(hào)’愈傷組織的誘導(dǎo)；B：‘春薯 3 號(hào)’愈傷組織的分化Figure 2.2 Induction and differentiation of ‘Chunshu3’callusA: induction of ‘Chunshu3’callus; B: differentiation of ‘Chunshu3’callus 號(hào)’馬鈴薯再生體系的建立 號(hào)’在除 C9 中均有愈傷組織形成，在 C5 中愈傷組織生長(zhǎng)狀態(tài).3），誘導(dǎo)率為 100%（表 2-5）。但愈傷組織在分化培養(yǎng)基中大，并且后期發(fā)生褐化（圖 2.3）。表 2-5‘春薯 5 號(hào)’莖段愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表Table 2-5 Statistics on callus induction results of ‘Chunshu5’stem segments接種外植體數(shù)（個(gè)） 出愈外植體數(shù)（個(gè)） 愈傷組織形態(tài) 誘導(dǎo)40 26 黃綠色 40 23 黃綠色

碩士學(xué)位論文 第二章 馬鈴薯再生體系結(jié)果 NAA 對(duì)‘春薯 5 號(hào)’愈傷組織誘導(dǎo)的影響最小，可以認(rèn)為 2mg/L 2,4-D+0.4mg/L KT 為‘春薯 5 號(hào)’愈傷組織最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基。誘導(dǎo)階段，‘春薯 5 號(hào)’在 S1 中不分化，僅表現(xiàn)出莖段的膨大；從 C5 織在 S2 中分化出芽，從接種到出芽結(jié)束用了 48d，分化率為 68.75%。
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本文編號(hào)：2886986