發(fā)布時間：2020-11-02 04:46

　　 白色紫錐菊是具有極高藥用價值和觀賞價值的多年生草本植物。國內(nèi)沒有其野生資源,且引種后不同地區(qū)人工栽培的白色紫錐菊品質(zhì)差異較大,難以滿足市場需求。因此,以白色紫錐菊不定根作為產(chǎn)品生產(chǎn)的原材料具有十分重要意義。為了提高不定根生物量和有效物質(zhì)積累,本文對白色紫錐菊不定根培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化。研究采用單因素和均勻設計試驗對培養(yǎng)基組分進行了篩選。單因素試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)最佳的磷濃度為0.94 mM,氮濃度為45 mM,硝態(tài)氮和銨態(tài)氮濃度比為37.5mM/7.5mM。采用3因素(氮、磷和蔗糖)12 水平(濃度)進行均勻試驗,發(fā)現(xiàn)不定根生物量和有效物質(zhì)積累最佳的組合為氮濃度45 mM、磷濃度1.56 mM和蔗糖濃度50 g·L-1,總酚和黃酮生產(chǎn)量分別達到297.91 mg·L-1和211.94 mg·L-1。進一步利用生物反應器進行了不定根培養(yǎng)動態(tài)研究,發(fā)現(xiàn)0～10 d為不定根生長的延遲期,10～30d為指數(shù)生長期,30～50 d為平穩(wěn)期。在培養(yǎng)30 d時不定根生長和有效物質(zhì)積累最多,鮮物重和干物重分別為304.28 g和29.82 g,而總酚和黃酮生產(chǎn)量分別達到398.99 mg·L-1和280.57 mg·L-1。因此,可確定30 d為白色紫錐菊不定根生物反應器培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)周期。在體外抗炎試驗中,進行了不定根提取物對脂多糖(LPS)誘導的小鼠腹腔巨噬細胞(PMs)促炎介質(zhì)釋放的影響研究。不同濃度提取物對幾種促炎介質(zhì)的抑制程度有差異,但濃度為100 pg·L-1時,對一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)的產(chǎn)生以及誘導型一氧化氮合酶(iNOS)和環(huán)氧化酶-2(COX-2)蛋白表達均具有顯著抑制作用。進一步,本研究探究了不定根提取物對核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB和絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)兩種信號通路相關蛋白表達的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)不定根提取物(25～100μg·mL-1)對NF-κB信號通路中的NF-κB抑制蛋白(IκB)-α表達無明顯影響,但可顯著降低MAPKs信號通路中的p38、ERK和JNK蛋白的磷酸化水平,表明白色紫錐菊不定根是通過調(diào)控MAPKs信號通路發(fā)揮抗炎作用。
【學位單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S567.239;R285.5
【部分圖文】：

中氮濃度為４５?ｍＭ，將ＮＯｒ和ＮＨ４＋調(diào)節(jié)成不同濃度，從而探宄其對不定根生物??量及有效物質(zhì)積累的影響。結(jié)果表明：當培養(yǎng)基中Ｎ０３－和ＮＨ４＋濃度比為０／４５?ｍＭ??時，白色紫錐菊不定根變粗不進行分化且顏色變深褐色（圖４），不定根生物量??及有效物質(zhì)積累最少。隨著培養(yǎng)基中ＮＯｒ濃度增加和ＮＨ４＋濃度減少，不定根的??生物量及有效物質(zhì)積累不斷增加。當ＮＯｒ和ＮＨ４＋濃度比為３７．５／７．５?ｍＭ時，不??定根分化出較多側(cè)根且顏色鮮亮（圖４），其生物量、總酚和黃酮含量及生產(chǎn)量??均達到最大值。其中，鮮物重和干物重分別為５５．４６?ｇ＇Ｌ－１和４．７４?ｇ＇Ｌ－１?（表４），??總酚含量和生產(chǎn)量分別為５３．５４?ｍｇ?ｇ－１和２５３．７８?ｍｇ?Ｌ－１，黃酮含量和生產(chǎn)量分別??為３７．５７ｍｇ．ｇ－１和１７８．０８?ｍｇ．Ｌ－１?（圖５）。當培養(yǎng)基中ＮＯｒ和ＮＨ４＋濃度比為４５／０??ｍＭ時，不定根分化較少且顏色發(fā)褐（圖４），其生物量以及有效物質(zhì)積累均有??所下降（表４和圖５）。綜上所述，當Ｎ０３－和ＮＨ４＋濃度比為３７．５／７．５?ｍＭ時，最??適合不定根生長及總酚和黃酮的積累。??圖４ＮＯｙ和ＮＨ４＋濃度對白色紫錐菊不定根生長的影響??Ｆｉｇ．?４?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＮＯ３＇?ａｎｄ?ＮＨ４＋?ｃｏｎｃｅｎｔｒ

生長狀況及色澤均好于其他處理（圖６）。而在磷濃度（＜］ｍＭ）較低時，過低??濃度（１號處理）或過高濃度（１１號處理）的氮，均不利于不定根鮮物重和干物??重的積累，１號和１１號處理的不定根鮮物重和干物重最少，與６號或８號處理??相比較，低約為５倍（表５）。干物重作為評價藥用植物生長狀況的重要指標，??是獲得大量藥用植物有效物質(zhì)的基礎。對均勻設計中干物重進行回歸方差分析，??結(jié)果表明，干物重的戶值（０．０４９）小于尸值（１９．６７）（表６），說明不定根千物??重與氮濃度、磷濃度和蔗糖濃度顯著相關。??

＼ｊ??時間的增加而逐漸增多，在３０?ｄ后不定根生長緩慢，趨于平穩(wěn)，且隨著培養(yǎng)時??間的延長不定根顏色逐漸加深至深褐色（圖８）。不定根培養(yǎng)液的電導率（ＥＣ）??與生物量有著相反的趨勢，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加呈現(xiàn)逐漸下降趨勢，在１０？２０?ｄ??期間急劇下降，而在２０￣３０ｄ下降幅度變小，在３０？５０?ｄ下降幅度相對比較平穩(wěn)??（圖９Ｂ）。培養(yǎng)液的ｐＨ隨著培養(yǎng)時間的增加而逐漸升高，在３０ｄ后趨于平穩(wěn)??（圖９Ｂ）。不定根培養(yǎng)期間，ＥＣ與不定根鮮物重（Ｒ２?＝?０．９７５）（圖９Ｃ）和ＥＣ??與不定根干物重（Ｒ２?＝?０．９８Ｏ２）（圖９Ｄ）呈現(xiàn)負線性相關。??表９反應器內(nèi)培養(yǎng)白色紫錐菊不定根的比生長速率和倍增時間??Ｔａｂｌｅ?９?Ｐｅｃｉｌｌｃ?ｇｒｏｗｔｈ?ｒａｔｅ?（ｐ）?ａｎｄ?ｄｏｕｂｌｉｎｇ?ｔｉｍｅ?（Ｔｄ）?ｏｆ?Ｅ．?ｐａｌｌｉｄａ?ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ?ｒｏｏｔ?ｇｒｏｗｔｈ??ｄｕｒｉｎｇ?ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ?ｃｕｌｔｕｒｅ??培養(yǎng)天數(shù)??１０?２０?３０?４０?５０??Ｃｕｌｔｕｒｅ?ｄａｙｓ??比生長速率??Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｇｒｏｗｔｈ?ｒａｔｅ?（ｊｊ）?０．１１７?０．１７４?０．０８３?０．００４?０．００２??５．９２３?３．９８３?８．３４９?，７３．２５０?３４６．５００??Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ?（Ｔｄ）??■棚１??
【參考文獻】

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本文編號：2866589