【摘要】：蓖麻(Ricinus communis L.)是一種重要的油料作物,具有較高的經(jīng)濟(jì)價值及市場地位。矮化蓖麻具有產(chǎn)量高、利于機械化收獲等優(yōu)點,成為近幾年蓖麻研究工作者的主攻方向。赤霉素(GA)是調(diào)節(jié)植物株高的重要激素,DELLA蛋白是GA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的關(guān)鍵調(diào)控元件,負(fù)向調(diào)節(jié)GA信號途徑,參與GA的降解,阻遏植物的生長和發(fā)育。本研究擬利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)對RcDELLA基因進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),利用多步層析技術(shù)純化該蛋白,進(jìn)行晶體生長條件的篩選,為深入研究DELLA生物學(xué)功能及其結(jié)構(gòu)解析工作奠定基礎(chǔ)。本研究克隆了RcDELLA(GAI)基因,構(gòu)建了pHAT-2-RcDELLA等7個原核表達(dá)載體,熱激轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)表達(dá)菌株,在0.1 mM IPTG、16℃、12-15h條件下進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),所得蛋白通過His柱親和層析、陰離子交換層析及分子篩層析,得到帶電性質(zhì)均一、單分散性較好的蛋白。質(zhì)譜結(jié)果顯示其為目標(biāo)蛋白,分子量為62.853 KD,該蛋白為單體形式存在。進(jìn)行RcDELLA蛋白結(jié)晶條件篩選,在3種緩沖條件下有晶體產(chǎn)生的跡象:0.1 M Sodium citrate tribasic dihydrate pH 5.0,30%V/V Jeffamine ED-2001 pH 7.0,0.2 M Ammonium acetate,0.1 M Tris pH 8.0,16%W/V Polyethylene glycol 10000,0.2 M Sodium nitrate,20%W/V Polyethylene glycol 3350,晶體性質(zhì)有待進(jìn)一步驗證。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古民族大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S565.6

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本文編號：2771045