【摘要】：土壤鹽漬化是危害水稻生產(chǎn)的重要非生物脅迫之一。近年來(lái)隨著氣候變暖、不合理灌溉以及過(guò)量施用化肥等農(nóng)業(yè)措施的影響,我國(guó)農(nóng)業(yè)用地鹽堿化程度不斷加深。水稻是我國(guó)主要的糧食作物之一,也是一種鹽敏感作物,土壤鹽漬化對(duì)水稻生產(chǎn)的發(fā)展影響很大。利用分子手段定位、克隆水稻苗期耐鹽基因并應(yīng)用于耐鹽水稻品種的選育已成為提高水稻耐鹽性,充分利用鹽堿耕地的重要途徑。本研究利用染色體片段代換定位方法,開(kāi)展了苗期耐鹽基因qSTS8的精細(xì)定位,區(qū)間內(nèi)基因組序列的預(yù)測(cè)分析。具體結(jié)果如下:1.以日本晴與法國(guó)稻雜交獲得的耐鹽F3家系為母本,與日本晴回交獲得的bC2F2群體為試驗(yàn)材料,進(jìn)一步將qSTS8定位區(qū)間縮小至水稻8號(hào)染色體長(zhǎng)臂端1個(gè)366Kb的范圍內(nèi),獲得與目標(biāo)基因緊密連鎖的上下游側(cè)翼標(biāo)記RM515和RM223。以P10-6為閾值,進(jìn)行單標(biāo)記回歸分析,共檢測(cè)到7個(gè)控制苗期耐鹽級(jí)別(STS)的單標(biāo)記位點(diǎn),貢獻(xiàn)率分布范圍為22%～31%,各位點(diǎn)的加性效應(yīng)均為正值,分布范圍為0.62～0.74;顯性效應(yīng)也均為正值,分布范圍為0.31～0.46。其中,貢獻(xiàn)率最大的位點(diǎn)為RM515和RM223,與初定位相比,貢獻(xiàn)率提高了 8%,加性效應(yīng)提高了 0.21。2.以BC2F2和BC3F2混合群體為實(shí)驗(yàn)材料,通過(guò)分子標(biāo)記輔助選擇,獲得目標(biāo)基因區(qū)段為雜合且具有日本晴遺傳背景的材料,構(gòu)成了 1個(gè)由4355個(gè)單株組成的精細(xì)定位群體。利用與目標(biāo)基因緊密連鎖的上、下游側(cè)翼標(biāo)記RM515和RM223,以及在定位區(qū)間內(nèi)開(kāi)發(fā)并篩選到7對(duì)多態(tài)性標(biāo)記進(jìn)行重組個(gè)體篩選,獲得定位區(qū)間內(nèi)發(fā)生遺傳重組的單株189個(gè),選取其中的105個(gè)單株用于精細(xì)定位,利用染色體片段代換定位方法,最終將水稻苗期耐鹽QTL qSTS8精細(xì)定位在標(biāo)記RM8265和RM223之間,1個(gè)大約167Kb的范圍內(nèi)。3.結(jié)合qSTS8精細(xì)定位區(qū)間,利用水稻基因組注釋網(wǎng)站(http://rice.plantbiology.msu.edu/)對(duì)區(qū)間內(nèi)序列進(jìn)行基因注釋和篩選,發(fā)現(xiàn)區(qū)間內(nèi)共有18個(gè)預(yù)測(cè)基因。以LOC_Os08g33150,LOC_Os08g33154,LOC_Os08g33160和LOC_Os08g33170為代表,對(duì)這18個(gè)基因分別進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)LOC Os08g33150含有HTH_MYB等相關(guān)蛋白元件,LOC_Os08g33154存在跨膜結(jié)構(gòu)域,LOC_Os08g33160是TIFY家族成員,含有ZIM結(jié)構(gòu)域,可能與植物抗逆相關(guān)。4.利用耐鹽親本法國(guó)稻和鹽敏感親本日本晴回交獲得的590個(gè)BC3F2單株為試驗(yàn)材料,利用覆蓋回交群體全部法國(guó)稻滲入片段的32個(gè)SSR標(biāo)記檢測(cè)群體各單株的基因型,開(kāi)展基因組前景和背景的分子標(biāo)記輔助選擇,從中篩選目標(biāo)基因區(qū)段為純合法國(guó)稻片段,其他遺傳背景盡可能接近輪回親本日本晴的單株,作為耐鹽滲入系。有120個(gè)單株表現(xiàn)為qSTS8區(qū)段為法國(guó)稻純合基因型,占總數(shù)的20.3%,可作為qSTS8耐鹽近等基因系的備選群體。該群體中,法國(guó)稻滲入片段分布范圍為2～16個(gè),平均滲入片段數(shù)6.4個(gè),純合片段數(shù)2.2個(gè),雜合片段數(shù)4.3個(gè),片段數(shù)分布符合正態(tài)分布。其中16668-122的耐鹽級(jí)別最高,為6.4,可作為耐鹽滲入系通過(guò)回交構(gòu)建耐鹽近等基因系,用于目標(biāo)基因的功能驗(yàn)證。
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夏大學(xué)碩士學(xué)位論文邐第二章材料與方以日本晴在ＮａＣｌ濃度為０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００ｍＭ條件下處理６天的癥狀為基準(zhǔn)，參照國(guó)際水稻所利用單株葉片受害程度為標(biāo)準(zhǔn)的鹽害級(jí)別制定了水稻苗期耐評(píng)價(jià)指標(biāo)（圖２．１）。其中，０、５０、１００、１５０、２００ｍＭＮａＣｌ脅迫下日本晴的耐鹽級(jí)別（Ｓａｌｔ邋Ｔｏｌｅｒａｎｏｒｅ，邋ＳＴＳ）分別為：９，７，５，邋３，邋１。逡逑９級(jí)：植株生長(zhǎng)發(fā)育正常，至少有５片綠葉，無(wú)明顯的葉片青枯，葉尖脫色、卷曲等癥狀，存活率達(dá)到８０．１邋％￣邋１００邋％。逡逑７級(jí)：植株生長(zhǎng)發(fā)育基本正常，有３？４片綠葉，外部葉片葉尖有較輕的千枯、褪色、卷曲等，葉片存活率達(dá)到６０．１邋％邋￣邋８０邋％。逡逑５級(jí)：植株生長(zhǎng)發(fā)育已不正常，有２片綠葉，葉片出現(xiàn)青枯、卷曲、大面積褪色，葉片存活．１％￣６０％。逡逑３級(jí)：植株生長(zhǎng)發(fā)育明顯受到抑制，僅有１片綠葉存活，除了幼葉外，其他葉片基本全部出枯、褪色、卷曲、發(fā)黃等癥狀，葉片存活率２０．１邋％￣４０％。逡逑１級(jí)：植株死亡或接近死亡，葉片干枯、發(fā)黃、褪色、卷曲等癥狀非常嚴(yán)重，葉片存活２０％。逡逑

ｃｈｒ８邐ＲＭ５８８７邐４５．１邐２４邐０．０００００邐０．６６邐０．４２逡逑ｃｈｒ８邐ＧＲ０１邐４５．１邐２４邐０．０００００邐０．６６邐０．４２逡逑ｃｈｒ８邐ＲＭ７３５６邐４５．５邐２４邐０．０００００邐０．６８邐０．３５逡逑ｃｈｒ８邐ＲＭ７２８５邐５７．８邐３０邐０．０００００邐－１７．６２邐－３．７９逡逑ｃｈｒ８邐ＲＭ５１５邐５７．５邐３０邐０．０００００邐－１６．４８邐－８．２７逡逑ｃｈｒ８邐ＲＭ２２３邐５９．２邐３１邐０．０００００邐－１６．０７邐－９．７８逡逑ＬＤＤ邐ｃｈｒ８邐ＲＭ６８５０邐４４．４邐２４邐０．０００００邐－１４．０８邐－８．４３逡逑ｃｈｒ８邐ＲＭ５８８７邐４７．９邐２６邐０．０００００邐－１５．６邐－５．５４逡逑ｃｈｒ８邐ＧＲ０１邐４６．７邐２５邐０．０００００邐－１５．３４邐－５．３５逡逑ｃｈｒ８邐ＲＭ７３５６邐４４．５邐２４邐０．０００００邐－１５．４４邐－３．４７逡逑ＬＲＳ：邋Ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ邋Ｒａｕｏ邋Ｓｔａｔｉｓｔ丨ｃ，似然比統(tǒng)計(jì)５１：；邐標(biāo)記位點(diǎn)解釋r捅湟斕墓畢茁剩海校罕曇強(qiáng)鬩蛐投孕宰次扌У母怕剩海粒洌洌哄義廈鬃苑ǎ椎鏡任或鏌虻募有孕вΓ海模錚恚豪醋苑ǎ穡螅櫚鏡任換虻南孕孕ы牽靛義希常保沖澹眩裕糖渥魍擠治鰣義蠎樸緬澹停幔皰澹停幔睿幔紓澹蟈澹眩裕兀猓玻板迦砑春锨渥魍跡ǎ茫錚恚穡錚螅椋簦邋澹桑睿簦澹潁觶幔戾澹停幔穡穡椋睿紓澹茫桑灣澹┓ǎ模罰常掊義隙ㄎ磺浣�？步缩小祫褭岩睍覡窟b停擔(dān)保島停遙停玻玻持洌笤跡常叮叮耍獾那淠冢ㄍ跡常玻�，获稻捔x希婺勘昊，

本文編號(hào)：2669319