【摘要】：水稻(Oryza sativa L.)是我國最主要的糧食作物之一。黑龍江省是我國水稻的主要產(chǎn)區(qū),常年遭受蟲害的影響,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。如果如果我們只是靠焚燒秸稈的傳統(tǒng)方法和化學(xué)農(nóng)藥方法防治蟲害,長此以往,不但會(huì)使害蟲產(chǎn)生抗藥性,還會(huì)對生態(tài)環(huán)境造也會(huì)成嚴(yán)重破壞。傳統(tǒng)的育種方式不單耗時(shí)過長,耗資龐大,而且難以培育出具有優(yōu)良抗蟲性狀的水稻品種。所以,運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)手段,培育出導(dǎo)入Bt基因的抗蟲水稻便成為有效解決此類問題的新途徑。松粳9號(hào)是寒區(qū)超級稻品種,以其高產(chǎn)抗病、米質(zhì)優(yōu)良等特性已在黑龍江廣泛種植多年。本實(shí)驗(yàn)以導(dǎo)入Bt基因的松粳9號(hào)HD3品系為實(shí)驗(yàn)材料,對其外源基因的整合、遺傳及表達(dá)等方面進(jìn)行檢測,并考察其農(nóng)藝性狀以評估其商業(yè)化價(jià)值。主要研究結(jié)果如下:1、通過對T9~T11連續(xù)三個(gè)世代間行Basta抗感性篩選、PCR檢測以及膠體金免疫層析試紙條檢測等實(shí)驗(yàn),得出轉(zhuǎn)cry1C*基因松粳9號(hào)HD3品系的外源基因在世代間穩(wěn)定性遺傳的結(jié)論。2、利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測目的基因cry1C*的轉(zhuǎn)錄水平得出:目的基因cry1C*的轉(zhuǎn)錄水平在不同生長階段的同一組織中存在差異;同一生長階段同一轉(zhuǎn)基因品系的不同組織中目的基因cry1C*的轉(zhuǎn)錄水平也存在明顯差異。酶聯(lián)免疫吸檢測得出結(jié)果表明:不同組織中的cry1C蛋白的含量差異顯著,其中cry1C蛋白含量最高的是葉片,最低的是糙米。3、通過Southern印記雜交檢測轉(zhuǎn)基因抗蟲早粳稻HD3品系外源基因拷貝數(shù),得出其中HD3-1為雙拷貝;HD3-2為單拷貝的整合結(jié)果。利用巢式PCR方法對單拷貝的HD3-2品系中的T-DNA區(qū)進(jìn)行側(cè)翼序列分離,并對產(chǎn)物進(jìn)行測序比對,確定其位于第3號(hào)染色體上,且外源基因的表達(dá)框架結(jié)構(gòu)完整。4、在農(nóng)藝性狀及稻米品質(zhì)方面,轉(zhuǎn)cry1C*基因抗蟲早粳稻HD3品系對照組松粳9號(hào)相比除株高外無顯著性差異。
【圖文】：

第 3 章 結(jié)果與分析因水稻外源基因的遺傳穩(wěn)定性ta 抗感性篩選 轉(zhuǎn)基因抗蟲早粳稻 HD3 品系水稻噴灑 Basta 7 天后所得結(jié)果，轉(zhuǎn)基因抗蟲早粳稻 HD3-1 和 HD3-2 植株健康生長，對照該結(jié)果說明，外源標(biāo)記基因 bar 基因已轉(zhuǎn)入到 HD3 品系水理論上講，和 bar 基因一起導(dǎo)入受體水稻品系松粳 9 號(hào)核基1C*存在且表達(dá)。

y1C*基因表達(dá)的定量檢測RNA 的表達(dá)量出 T11 代轉(zhuǎn)基因抗蟲早粳稻 HD3 品系與空白對照組松粳 9 號(hào)苗的莖鞘、葉片與幼穗的總 RNA，，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)，實(shí)示。該電泳圖中顯示：HD3 品系水稻及其對照松粳 9 號(hào)都顯示品的 18S 與 28S 的 rRNA 條帶清楚可見，沒有降解現(xiàn)象和摻雜 D。該結(jié)果說明，所提取的水稻各組織樣品 RNA 質(zhì)量良好，可用驗(yàn)，合成 cDNA 第一鏈。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S511.22

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本文編號(hào)：2668560