昆蟲嗅覺系統(tǒng)作為昆蟲進行覓食、尋偶、交配等一系列生命活動的化學監(jiān)測器,能特異的識別環(huán)境中的信息化學物質(zhì)。長足大竹象（Cvrtotrachelusbuqueti）是我國南方重要的鉆蛀性林業(yè)害蟲,危害多種叢生竹類,嚴重影響竹類產(chǎn)業(yè)發(fā)展。在昆蟲世代繁衍過程中,雌雄個體間如何通過嗅覺系統(tǒng)遠距離精確搜索定位成為雌雄個體間是否有效交流的關(guān)鍵。本文根據(jù)前期高通量測序篩選序列,利用RT-PCR技術(shù)成功克隆得到長足大竹象的一個性信息素結(jié)合蛋白基因,利用SYBR Green Ⅰ熒光染料法,采用熒光定量PCR（quantitative PCR,qPCR）分析了CbuqPBP 在雌雄成蟲不同組織中的轉(zhuǎn)錄表達譜,并進行表達純化,運用熒光競爭結(jié)合技術(shù)對該蛋白與主要蟲體揮發(fā)物和寄主揮發(fā)物等的結(jié)合特性進行分析,初步探討了該蛋白的功能。主要研究結(jié)果如下:1.根據(jù)前期高通量測序結(jié)果（GenBanknumber:SAMN06176790）篩選設(shè)計引物,運用RT-PCR技術(shù)克隆得到長足大竹象性信息素結(jié)合蛋白PBP1基因（Genebank登錄號為KU845733.1）,編碼143個氨基酸,N-末端包含17個氨基酸,預測為信號肽... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１昆蟲嗅覺感器的結(jié)構(gòu)組成??Ｆｉｇ．?１?Ｇｅｎｅｒａｌ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｎ?ｉｎｓｅｃｔ?ｏｌｆａｃｔｏｒｙ?ｓｅｎｓｉｌｈｉｍ｜－?’１??

維持其三維結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，ａｌ，〇５，?ａ６和ａ４反向平行組成一個可以特異結(jié)合信息素??的燒瓶狀（ｆｉａｓｋ）的結(jié)合兜，其一端被ａ３螺旋覆蓋（己被２個二硫鍵固定），另一??端則因為螺旋緊縮而變窄［６５］（如圖２所示）。在后來的研宄中，龔達平等［４７］也有相??同的發(fā)現(xiàn)，家蠶的５個氨基酸序列（ＰＢＰ１、ＰＢＰ２、ＰＢＰ３、Ｇ０ＢＰ１和ＧＯＢＰ２）每個??５??

對擴增出的長足大竹象ＰＢＰ基因片段進行割膠回收后，與ｐＭＤ?Ｔ－】９?ｖｅｃｔｏｒ克隆??載體進行連接，并轉(zhuǎn)化入Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ感受態(tài)細胞，通過藍白斑篩選，隨機挑�。競�??白斑進行菌落ＰＣＲ鑒定，鑒定結(jié)果均為陽性克�。▓D５）。??］?２?３?４?５?６?７?８?Ｍａｒｋｅｒ??■?ｈｐ??２０００??１０００??ＩＳ??圖５菌落ＰＣＲ鑒定結(jié)果??Ｆｉｇ．５?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｃｏｌｏｎｙ??１－８泳道：８個白斑菌落ＰＣＲ結(jié)果；９泳道：標準分子量（從左向右）??Ｌａｎｅ?１－８：?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｅｉｇｈｔ?ｗｈｉｔｅ?ｃｏｌｏｎｉｅｓ；?ｌａｎｅ?９：?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｗｅｉｇｈｔ?ｍａｒｋｅｒ?（ｆｒｏｍ?ｌｅｆｔ?ｔｏ??ｒｉｇｈｔ）??２８??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于新一代測序技術(shù)的昆蟲轉(zhuǎn)錄組學研究進展[J]. 張棋麟,袁明龍.  昆蟲學報. 2013(12)
[2]玉米螟性信息素田間誘捕玉米螟的應用研究[J]. 梁霆,周舒揚,孫宇峰,殷博.  北京農(nóng)業(yè). 2013(09)
[3]贛南叢生竹重要害蟲的發(fā)生及其生態(tài)控制對策[J]. 廖忠明,李滋仁,郭曉敏.  湖北農(nóng)業(yè)科學. 2013(04)
[4]長足大竹象成蟲體表信息化學物質(zhì)的提取和鑒定[J]. 忙定澤,羅慶懷,舒敏,韋衛(wèi).  昆蟲學報. 2012(03)
[5]高通量測序技術(shù)在動植物研究領(lǐng)域中的應用[J]. 岳桂東,高強,羅龍海,王軍一,許姣卉,尹燁.  中國科學:生命科學. 2012(02)
[6]象甲科昆蟲信息素研究概況[J]. 楊毅,梁瀟予,楊春平,楊樺,楊偉.  浙江農(nóng)林大學學報. 2012(01)
[7]煙夜蛾性信息素結(jié)合蛋白2（PBP2）基因的克隆、序列分析與時空表達[J]. 李亮,楊文玲,郭線茹,羅梅浩,原國輝,喬奇,付曉偉.  昆蟲學報. 2009(11)
[8]棉鈴蟲信息素結(jié)合蛋白2 cDNA的克隆、表達與組織特異性表達[J]. 張帥,張永軍,蘇宏華,高希武,郭予元.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2009(07)
[9]性誘劑防治冬棗桃小食心蟲[J]. 張利華.  河北林業(yè). 2009(02)
[10]云南木蠹象雌雄蟲氣味化合物比較分析[J]. 王超英,楊燕,劉正忠,鄭紅軍,楊茂發(fā),閆鳳鳴.  河南農(nóng)業(yè)大學學報. 2008(04)

博士論文
[1]泥蚶高通量轉(zhuǎn)錄組分析及生長相關(guān)基因的克隆與表達研究[D]. 董迎輝.中國海洋大學 2012
[2]綠盲蝽（Apolygus lucorum）性信息素的提取鑒定及應用研究[D]. 張濤.中國農(nóng)業(yè)科學院 2011
[3]家蠶氣味結(jié)合蛋白基因的研究[D]. 張升祥.山東農(nóng)業(yè)大學 2009

碩士論文
[1]蘋果蠢蛾成蟲觸角感器超微結(jié)構(gòu)及信息素結(jié)合蛋白基因的克隆與序列分析[D]. 趙驍.西北農(nóng)林科技大學 2012
[2]象鼻蟲性信息素中間體的合成與氧化端位羥基酰胺為環(huán)酰亞胺的反應研究[D]. 楊艷艷.天津大學 2012
[3]草地螟普通氣味分子結(jié)合蛋白的組織特異表達及結(jié)合特性分析[D]. 孫紅巖.吉林大學 2011
[4]草地螟觸角氣味結(jié)合蛋白基因克隆及表達[D]. 鐘濤.西南大學 2008



本文編號：3023278