稻瘟病是由稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）侵染水稻引起的真菌性病害,稻瘟病的發(fā)生嚴(yán)重威脅了水稻的產(chǎn)量和品質(zhì),造成了嚴(yán)重的損失。稻瘟病菌的侵染過程和致病機(jī)理在絲狀真菌中具有典型特征,稻瘟病菌已經(jīng)成為病原真菌與寄主植物相互作用機(jī)理研究的重要模式生物。研究稻瘟病菌侵染相關(guān)的功能基因,對解析植物病原真菌的致病機(jī)理和稻瘟病的防治都具有重要意義�；蚪M中,兩個或多個功能上緊密聯(lián)系的基因,聚集在一起成簇出現(xiàn),相互協(xié)作共同參與調(diào)節(jié)同一個代謝或發(fā)育途徑,稱為一個基因簇。基因簇是原核生物基因組的一個常見現(xiàn)象和重要特征,如植物病原細(xì)菌中的“致病島”等。絲狀真菌中基因簇的發(fā)掘和功能研究相對較少,已報(bào)道的有粗糙脈胞菌和構(gòu)巢曲霉中調(diào)節(jié)奎尼酸代謝（qa gene cluster）和黑色素合成的基因簇等。至目前,植物病原真菌中,基因簇的功能研究鮮有報(bào)道,基因簇在病菌致病過程中的作用我們知之甚少。為了進(jìn)一步了解真菌中的基因簇,揭示基因簇對植物病原菌侵染過程的生物學(xué)作用,我們對稻瘟病菌中一個可能的基因簇的功能進(jìn)行了探索。稻瘟病菌假想蛋白 MGG₁0528,MGG₁...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
上篇 文獻(xiàn)綜述 稻瘟病菌功能基因研究進(jìn)展
    1 稻瘟病菌
        1.1 稻瘟病菌研究概況
        1.2 稻瘟病菌的侵染循環(huán)
        1.3 稻瘟病菌致病相關(guān)基因
            1.3.1 外界信號識別的相關(guān)基因
            1.3.2 與產(chǎn)孢相關(guān)基因
            1.3.3 附著胞分化相關(guān)基因
            1.3.4 黑色素形成積累的相關(guān)基因
            1.3.5 甘油合成的相關(guān)基因
            1.3.6 參與侵入和侵入后擴(kuò)展的相關(guān)基因
    2 真菌基因簇
        2.1 調(diào)節(jié)奎尼酸代謝的基因簇
        2.2 調(diào)節(jié)乙醇代謝的基因簇
        2.3 調(diào)節(jié)脯氨酸代謝的基因簇
    3 稻瘟病菌中一個可能的基因簇
        3.1 相關(guān)基因研究概況
            3.1.1 Zn₂Cys₆鋅指蛋白
            3.1.2 糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
            3.1.3 NLP蛋白家族
    4 本研究的目的及意義
下篇 研究內(nèi)容
    1 材料與方法
        1.1 供試菌株及培養(yǎng)條件
        1.2 培養(yǎng)基
        1.3 基因序列分析
        1.4 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)
            1.4.1 常規(guī)PCR
            1.4.2 實(shí)時熒光定量PCR
        1.5 基因敲除
            1.5.1 基因敲除載體的構(gòu)建及真菌轉(zhuǎn)化
            1.5.2 轉(zhuǎn)化子的篩選及驗(yàn)證
            1.5.3 突變體菌株單孢分離
        1.6 稻瘟病菌DNA的提取
            1.6.1 玻璃珠法(用于轉(zhuǎn)化子的PCR驗(yàn)證)
            1.6.2 CTAB法
        1.7 蛋白定位載體構(gòu)建
        1.8 突變體表型分析
            1.8.1 生長速度及菌落形態(tài)
            1.8.2 對不同碳源利用能力測定
            1.8.3 對活性氧的耐受性及細(xì)胞壁完整性測定
            1.8.4 有性生殖
            1.8.5 致病性測定
    2 結(jié)果分析
        2.1 基因序列分析
        2.2 MGG₁0528和MGG₁0529的亞細(xì)胞定位
        2.3 基因敲除
        2.4 基因的時空表達(dá)動態(tài)
        2.5 表型分析
            2.5.1 菌落形態(tài)及生長速度
            2.5.2 致病性檢測
            2.5.3 對活性氧的耐受性
            2.5.4 細(xì)胞壁強(qiáng)度測定
            2.5.5 對不同碳源的利用能力
            2.5.6 有性生殖
    3 小節(jié)和討論
參考文獻(xiàn)
附錄1 培養(yǎng)基配方
附錄2 緩沖液配方
附錄3 大腸桿菌轉(zhuǎn)化
附錄4 膠回收(DNA片段)
附錄5 小劑量DNA質(zhì)粒的提取
附錄6 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備與轉(zhuǎn)化
附錄7 稻瘟病菌AtMT轉(zhuǎn)化
附錄8 縮略詞
致謝



本文編號：4031713