水稻Pik位點含有至少6個抗病基因,它們都包含在該位點功能區(qū)域中。因此,有效區(qū)分出功能區(qū)域是鑒定該基因座功能基因的首要條件。本研究通過對水稻抗稻瘟病Pik基因座上已克隆的功能基因,包括Pik、Pi-k^p、Pi-k^h、Pi-1、Pi-k^m和Pi-k^s及非功能基因序列的相互對比,鑒定到Pik基因座特異的核苷酸差異,開發(fā)了基于PCR技術(shù)的Pik基因座的插入/缺失(insert-deletion, InDel)標(biāo)記,能有效地將Pik上功能基因與其它非功能基因的基因座區(qū)分開。利用Pik基因座的分離群體進(jìn)行標(biāo)記選擇與接種鑒定,結(jié)果表明Pik-InDel標(biāo)記能精確的選擇出Pik功能基因座。用Pik-InDel標(biāo)記對20份重要水稻不育系進(jìn)行分子檢測,該標(biāo)記能準(zhǔn)確地將抗性基因座與其它非抗病基因座區(qū)分開來,這為篩選水稻稻瘟病抗性種質(zhì)資源,以及抗性標(biāo)記輔助抗病育種提供了便利。

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圖1日本晴與部分同源功能基因在差異位點的序列比對

為確定Pik-InDel標(biāo)記對Pik位點功能基因選擇效果，本研究構(gòu)建了IRBL1-CL(Pi1)與LTH的F2代分離群體，并利用Pi1基因非親和菌株CHL346接種鑒定。鑒定結(jié)果表明，在200株分離群體中，有141株表現(xiàn)抗病，59株表現(xiàn)感病，符合3∶1的分離比。經(jīng)Pik-InDe....

圖2Pik-InDel在Pik基因簇區(qū)域不同稻瘟病抗性基因及日本晴,LTH的驗證

圖1日本晴與部分同源功能基因在差異位點的序列比對1.3Pik-InDel在20個品種中的篩選應(yīng)用

圖3Pik-InDel應(yīng)用于20個水稻品種的篩選

針對上述情況，本研究開發(fā)出的分子標(biāo)記，能將Pik位點上的不同功能性等位基因區(qū)與非功能基因區(qū)分出來，并使用該標(biāo)記鑒定了20份水稻不育系品種，PCR結(jié)果表明這些水稻不育系品種都不含有該位點的功能基因。因此，下一步可以利用Pik位點的功能基因，結(jié)合Pik-InDel標(biāo)記對它們進(jìn)行改良。....

本文編號：3982183