柑橘黃龍病(Candidatus Liberibacter,spp)是柑橘病害中最重要的病害之一,同時(shí)也是柑橘病害中重要的檢疫性有害生物,病原菌為韌皮部桿菌(Candidatus Liberiba cter spp)。柑橘產(chǎn)業(yè)因黃龍病的影響造成每年巨大的經(jīng)濟(jì)損失。我國最先發(fā)現(xiàn)柑橘黃龍病的地區(qū)是廣東省,在幾年前湖南省還屬于柑橘黃龍病發(fā)生的偶發(fā)區(qū),隨著信息和物流更加便捷有毒苗木跨地區(qū)的運(yùn)輸,同時(shí)隨著全球氣溫的升高擴(kuò)大了柑橘木虱的活動(dòng)范圍,我省的柑橘黃龍病已經(jīng)成區(qū)域性存在,甚至有向全省蔓延的趨勢(shì)。為了確定目前湖南省的柑橘黃龍病具體分布情況、最適宜的檢測(cè)方法、以及不同地方不同寄主的柑橘黃龍病病原菌的差異性。篩選出一對(duì)特異性和靈敏度高的引物,對(duì)湖南省疑似柑橘黃龍病的樣品同時(shí)采用常規(guī)PCR、巢式PCR和LAMP等不同的方法進(jìn)行檢測(cè),進(jìn)行靈敏度比較和應(yīng)用分析,最后通過分析不同地區(qū)和不同寄主的柑橘黃龍病病原菌16S rRNA、gyrB和omp基因序列的差異性。最后得到試驗(yàn)結(jié)果如下:1、通過常規(guī)PCR篩選引物F3/B3、F1/B1、gyr1/gyr2、OI1/OI2和16s3/16s4共5對(duì)引物,得到引...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖2-1引物F1/B1（A)、16s3/16s4(B)、gyr1/gyr2(C)、F3/B3(D)和OI1/OI2(E)常規(guī)PCR檢測(cè)靈敏

-C）；引物F3/B3最高可以檢測(cè)到1000×10-2ng/μg（圖2-1-D)；引物OI1/OI2最高可以檢測(cè)到1000×10-1ng/μg（圖2-1-E)。從擴(kuò)增結(jié)果可的，引物F3/B3和OI1/OI2擴(kuò)增片段都屬于較長片段（片段大小都在1100pb....

圖2-3可視化LAMP靈敏度檢測(cè)比較

kDL2000；1-10：依次為1000×10-1、1000×10-2、1000×10-3、1000×10-4、1000×10-5、1000×1×10-7、1000×10-8、1000×10-9、1000×10-10ng/μg的DNA梯度稀釋。圖2-3可視化LAM....

圖2-4疑似橘黃龍�。òY狀：斑駁）常規(guī)PCR（A）、巢式PCR（B）和可視化LAMP（C）檢測(cè)比較

17LAMP（C）M：MarkDL2000；+：陽性對(duì)照；-：陰性對(duì)照?qǐng)D2-4疑似橘黃龍�。òY狀：斑駁）常規(guī)PCR（A）、巢式PCR（B）和可視化LAMP（C）檢測(cè)比較Fig2-4Thesuspecteddisease(symptoms:mottledor....

圖2-5引物OI1/OI2和F1/B1常規(guī)PCR驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

頂枯36554494612其他癥狀3633225147A-E:從左往右以引物F1/B1、16S3/16S4、gyr1/gyr2、F3/B3和OI1/OI2為常規(guī)PCR；AD-BE:分別代表引物F3/B3→F1/B1和OI1/OI2....

本文編號(hào)：3951707