青枯勞爾氏菌(Ralstonia solanacearum)侵染寄主植株的維管束,導(dǎo)致青枯病的發(fā)生,進(jìn)而造成植株的死亡,俗稱(chēng)“植物瘟病”,是全球熱帶和亞熱帶地區(qū)的重要植物病害,青枯菌可以侵染54個(gè)科的數(shù)百種植物。到目前為止還沒(méi)有一種能夠有效防治青枯病的農(nóng)業(yè)措施、物理措施或者化學(xué)措施,因此生物防治日益受到人們的重視。本研究分為三個(gè)部分:1、青枯菌GMI1000菌株的eGFP標(biāo)記;2、青枯拮抗菌的篩選鑒定和溫室接種實(shí)驗(yàn);3、拮抗菌GZ-34活性物質(zhì)的提取分離鑒定和發(fā)酵條件優(yōu)化,拮抗菌GZ-34對(duì)黑粉菌和稻瘟菌的抑制作用。主要研究結(jié)果如下:1、構(gòu)建PBBR1-2-eGFP質(zhì)粒,轉(zhuǎn)入青枯菌,獲得eGFP標(biāo)記的青枯菌菌株。2、從廣東廣州、河南永城、湖南永州等30地共采集土樣30份,采用土壤稀釋?xiě)腋∫悍蛛x法,涂布LB平板,挑取單菌落,在青枯菌平板上通過(guò)對(duì)峙生長(zhǎng)篩選得到384株有明顯拮抗效果的菌株,然后對(duì)初篩的拮抗菌搖菌發(fā)酵進(jìn)行復(fù)篩,得到有穩(wěn)定拮抗效果的菌株56株。3、對(duì)篩選得到的拮抗菌菌株進(jìn)行鑒定,結(jié)果為:菌株GZ-27為單不動(dòng)桿菌(Acinetobacter soli),保藏編號(hào)為CCTCC N...

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1青枯菌致病性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)（Peetersetal.,2013）

10（Aldonetal.,2000）。PrhA是一種外模受體蛋白，感知該信號(hào)并傳遞至膜結(jié)合蛋白PrhI和PrhR，通過(guò)連續(xù)誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子PrhJ、PrhG和PrhB，從而引起Hrp/Hrc的表達(dá)（Britoetal.,2002）。在體外轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究表明，Hrp調(diào)節(jié)子控制除了T....

圖1-2青枯菌的群體感應(yīng)調(diào)控系統(tǒng)（VonBodmanetal.,2003）

11的群體感應(yīng)調(diào)控系統(tǒng)，兩個(gè)系統(tǒng)協(xié)同調(diào)控青枯菌的致病性（Maddocksetal.,2008）（圖1-2）。圖1-2青枯菌的群體感應(yīng)調(diào)控系統(tǒng)（VonBodmanetal.,2003）1.8本論文的研究目的和意義目前，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中主要采用化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行青枯病的防治，但無(wú)法有效防止該病....

圖2-1PCR目的片段電泳圖

18（3）將上述感受態(tài)細(xì)胞小心轉(zhuǎn)移到電擊杯中，放入電擊儀。設(shè)定電擊儀的電壓。0.2cm的電擊杯對(duì)應(yīng)的電壓為2.5KV。（4）電擊，結(jié)束后迅速取出電擊杯，加入500μL不加抗性的LB培養(yǎng)基，并轉(zhuǎn)移到滅過(guò)菌的離心管中。（5）轉(zhuǎn)化后的菌液置于28℃搖床復(fù)蘇1小時(shí)。（6）復(fù)蘇過(guò)后，取10....

圖2-2eGFP標(biāo)記青枯菌菌液

192.2.2連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌DH5α連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入大腸桿菌，在體式熒光顯微鏡下觀察，挑取發(fā)熒光的菌落，用菌落PCR方法篩選鑒定陽(yáng)性克隆，提取質(zhì)粒并保存菌種。2.2.3青枯菌eGFP標(biāo)記菌株的鑒定轉(zhuǎn)化青枯菌后，在含Kan抗性的TTC平板長(zhǎng)出單菌落，在熒光體式顯微鏡下觀察有....

本文編號(hào)：3946550