植物雙生病毒是一類在世界范圍內(nèi)廣泛發(fā)生,造成經(jīng)濟(jì)作物產(chǎn)量嚴(yán)重?fù)p失的單鏈DNA病毒。本課題利用菜豆金色花葉病毒屬雙生病毒,中國番茄黃曲葉病毒(Tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)作為研究對象,通過遺傳學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)等手段對其衛(wèi)星DNA(Tomato yellow leaf curl China betasatellite,TYLCCNB)編碼的βC1蛋白在病毒侵染植物過程中的功能進(jìn)行深入的探究。促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-acticvated protein kinase,MAPKs)是一類真核生物中普遍存在的絲/蘇氨酸蛋白激酶,由此形成的MAPK級聯(lián)途徑是真核生物中保守的信號傳導(dǎo)方式,其主要作用是將外界刺激信號傳入細(xì)胞內(nèi),使細(xì)胞及時(shí)作出有效的應(yīng)答反應(yīng)。本課題首先利用免疫沉淀的方法富集在本氏煙中瞬時(shí)表達(dá)的βC1蛋白并進(jìn)行質(zhì)譜分析,在βC1蛋白復(fù)合物中檢測到7條匹配本氏煙MAPK激酶NbSIPKK的肽段序列,覆蓋蛋白6個(gè)區(qū)域共14.4%的序列。以NbSIPKK在模式植物擬南芥中的同源物MKK2進(jìn)行進(jìn)一步分析,通過酵母雙...

【文章頁數(shù)】：151 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1雙生病毒科不同屬白

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文?緒論??（Ｒｏｕｍａｇｎａｃ?ｅｔ?ａｌ．，２０１５）。該病毒屬的潛在自然寄主為苜菅財(cái)（咖他ｃｒａｃｃ／ｖｏｒａ）??（Ｒｏｕｍａｇｎａｃ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１５；?Ｖａｒｓａｎｉ?ｅｔ?ａｌ”?２０１７）。??

圖３．１：免疫沉淀分離到的ｐＣｌ復(fù)合物??Ｆｉｇｕｒｅ３．１：?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?ＰＣＩ?ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ?ｃｏｍｐｌｅｘ??

簽的載體作為實(shí)驗(yàn)的對照組。用４－２０％的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ梯度膠將（３Ｃ１復(fù)合物根據(jù)蛋??白分子量分開后，選取在（３Ｃ１復(fù)合物存在但是在對照組沒有的條帶進(jìn)行質(zhì)譜分析??（圖３．?１）。??３５Ｓ：Ｆｌａｇ－??４Ｍｙｃ－ｐＣ１?ＷＴ??２５０??１５０??１００??７５?ｍｍ??一....

圖３．５雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ＰＣＩ蛋白與ＭＫＫ２的互作

與ＭＫＫ２蛋白在植物體內(nèi)的互作情況。在本氏煙葉片內(nèi)瞬時(shí)表達(dá)ｎａｇ－ＭＫＪＣ２和??ＧＦＰ－（３Ｃ１融合蛋白，４８?ｈ后取樣進(jìn)行免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)中，Ｆｌａｇ－ＭＫＫ２與ＧＦＰ??空標(biāo)簽的組合以及植物內(nèi)源蛋白Ａｃｔｉｎ為陰性對照。如圖３．６所示，在免疫共沉淀??蛋白復(fù)合物中可以檢....

圖３．６免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證０（：１蛋白與＾＾１＜＾２蛋白在植物體內(nèi)的互作

光蛋白標(biāo)記的組蛋白Ｈ２Ｂ轉(zhuǎn)基因本氏煙（ＲＦＰ－Ｈ２Ｂ）葉片中共同表達(dá)，４８ｈ后通??過激光共聚焦顯黴鏡進(jìn)行觀察可以發(fā)現(xiàn)，ＰＣ１蛋白不能夠與ＭＫＫ２蛋白的Ｎ端互??作，僅能夠與Ｃ端和激酶功能域互作（圖３．７）。這一結(jié)果說明ＭＫＫ２蛋白與ｐＣｌ??蛋白的互作區(qū)域在ＭＫＫ２蛋白的激酶功....

本文編號：3946442