面對(duì)病原菌攻擊時(shí),植物因其固著生長(zhǎng)方式不能移動(dòng),因此進(jìn)化出了一套自身先天免疫系統(tǒng)對(duì)抗病原菌的侵害。在植物先天免疫中,核苷酸結(jié)合-富含亮氨酸重復(fù)序列NLR(Nucleotide binding-leucine rich repeat)蛋白可以識(shí)別來(lái)自病原菌的效應(yīng)因子發(fā)揮重要作用。TN(TIR-NBS)蛋白是其中一類(lèi)非典型NLR蛋白,缺少富含亮氨酸重復(fù)序列,但是TN蛋白參與植物免疫的作用機(jī)制尚不清楚。擬南芥RPS5(PSEUDOMONAS SYRINGAE 5)是一個(gè)典型的CNL(CC-NBS-LRR)類(lèi)NLR蛋白,可以識(shí)別丁香假單胞桿菌(Pseudomonas syringae)III型效應(yīng)因子Avr Pph B激活下游抗性,但是RPS5介導(dǎo)的免疫途徑是否需要其它NLR蛋白未見(jiàn)報(bào)道。為了探究TNs蛋白在植物免疫中的功能以及是否參與RPS5介導(dǎo)的植物免疫,我們首先通過(guò)熒火素酶互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)LUC(Split-Luciferase Complementation)篩選與RPS5存在相互作用的TNs蛋白,發(fā)現(xiàn)TN13和TN21與RPS5都存在相互作用。后續(xù)表型分析顯示只有tn13-2突變體表現(xiàn)出對(duì)P...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 植物病原菌
    1.2 植物天然免疫系統(tǒng)
        1.2.1 PTI反應(yīng)
        1.2.2 模式識(shí)別受體(PRRs)
        1.2.3 ETI反應(yīng)
        1.2.4 R蛋白的結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.5 R蛋白的激活
        1.2.6 R蛋白對(duì)在植物免疫反應(yīng)中的作用
        1.2.7 ETI下游信號(hào)通路和免疫反應(yīng)
        1.2.8 非典型R蛋白在植物免疫中的功能
    1.3 本論文的選題意義和研究目標(biāo)
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        2.1.1 擬南芥材料
        2.1.2 菌株
        2.1.3 載體
        2.1.4 酶和其他分子生物學(xué)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 培養(yǎng)基和常用溶液
        2.3.1 常用培養(yǎng)基
        2.3.2 植物基因組DNA提取液
        2.3.3 植物蛋白提取相關(guān)溶液
        2.3.4 western blot相關(guān)溶液
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 植物播種和生長(zhǎng)條件
        2.4.2 丁香假單胞桿菌接菌實(shí)驗(yàn)
        2.4.3 植物基因組DNA提取實(shí)驗(yàn)
        2.4.4 植物總RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄
        2.4.5 實(shí)時(shí)定量PCR
        2.4.6 PCR獲得目的基因
        2.4.7 限制性?xún)?nèi)切酶進(jìn)行雙酶切
        2.4.8 T4連接酶進(jìn)行載體與片段的連接
        2.4.9 Gateway系統(tǒng)連接酶進(jìn)行載體與片段的連接
        2.4.10 同源重組進(jìn)行載體與片段的連接
        2.4.11 大腸桿菌感受態(tài)的制備
        2.4.12 大腸桿菌感受態(tài)轉(zhuǎn)化
        2.4.13 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備
        2.4.14 農(nóng)桿菌感受態(tài)的轉(zhuǎn)化
        2.4.15 陽(yáng)性菌落的鑒定
        2.4.16 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草瞬時(shí)表達(dá)
        2.4.17 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的擬南芥轉(zhuǎn)化
        2.4.18 植物總蛋白提取
        2.4.19 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
        2.4.20 western blot實(shí)驗(yàn)
        2.4.21 熒火素酶互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)
        2.4.22 BiFC實(shí)驗(yàn)
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 TNs蛋白與RPS5 相互作用的初步篩選
    3.2 tn13-2和tn21-1 T-DNA插入突變體的鑒定
    3.3 tn13-2 突變體表現(xiàn)出對(duì)Pto DC3000 avr Pph B增強(qiáng)的感病性
    3.4 tn13-2 tn21-1 雙突變體沒(méi)有表現(xiàn)出對(duì)Pto DC3000 avr Pph B更強(qiáng)的感病性
    3.5 TN13基因互補(bǔ)了tn13-2的表型
    3.6 TN13部分參與RPS5介導(dǎo)的植物免疫
    3.7 TN13 特異參與了植物對(duì)細(xì)菌Pto DC3000 avr Pph B的抗性
    3.8 TN13與RPS5相互作用
    3.9 TN13 主要與RPS5的CC結(jié)構(gòu)域相互作用
第四章 結(jié)論與討論
    4.1 TN13特異且部分參與RPS5介導(dǎo)的植物免疫
    4.2 TN13 可能作為RPS5 一個(gè)“Helper”蛋白發(fā)揮功能
    4.3 TN13參與RPS5介導(dǎo)植物免疫的工作模型
    4.4 主要結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間的學(xué)術(shù)論文與研究成果
致謝



本文編號(hào)：3904754