水稻條紋葉枯病曾在我國多次爆發(fā)流行,給我國的水稻生產(chǎn)造成了極其慘重的損失。該病害由水稻條紋病毒(Rice stripe virus,RSV)引起,其編碼的p3蛋白是一個RNA沉默抑制子,在RSV致病過程中起關(guān)鍵作用。為解析p3的致病機(jī)制,本研究通過酵母雙雜交實驗在水稻中篩選得到2個候選的p3靶標(biāo)蛋白,分別為水稻W(wǎng)RKY40轉(zhuǎn)錄因子(WRKY transcription factor 40,OsWRKY40)和水稻脂類相關(guān)質(zhì)體蛋白(Plastid lipid-associated protein 2,OsPAP2),并獲得了靶標(biāo)蛋白基因的全長。同時,本研究在本氏煙中克隆得到OsPAP2與OsWRKY40的同源基因,即NbPAP與NbWRKY40。進(jìn)一步利用酵母雜交實驗、Pull-down和雙分子熒光互補(bǔ)實驗(BiFC)證實了OsPAP2、NbPAP、OsWRKY40、NbWRKY40在體內(nèi)外均與p3互作。亞細(xì)胞定位研究顯示:OsPAP2和NbPAP蛋白主要定位于葉綠體上,OsWRKY40和NbWRKY40蛋白特異性地分布于細(xì)胞核中,p3蛋白單獨表達(dá)時定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中。但在BiFC實...

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1候選陽性克隆在SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-α-Gal平板上的顯色檢測Fig2.1AnalysisoftheputativepositiveclonesontheSD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-ɑ-Galplat

隆在SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-α-GautativepositiveclonesontheSD/-Leu/-T段的鑒定及同源性分析/-His/-Ade/X-α-Gal營養(yǎng)缺陷型培/-Leu/-Trp液體培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)DNA文庫的通用引....

圖2.2部分候選陽性克隆的酵母菌落PCR檢測1-5，陽性克隆的PCR產(chǎn)物；M，DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)

圖2.1候選陽性克隆在SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-α-Gal平板上的顯色檢測Fig2.1AnalysisoftheputativepositiveclonesontheSD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-ɑ-Gal....

圖2.3水稻中2個目的基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果

PCR擴(kuò)增的特異引物，以水稻幼苗葉片cDNA為模板PCR擴(kuò)增2個寄主因子的全長基因。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示OsWRKY40和OsPAP2基因PCR擴(kuò)增片段的大小均與預(yù)期結(jié)果相一致（圖2.3）。將PCR產(chǎn)物分別克隆到克隆T載體上進(jìn)行測序驗證。返還的測序結(jié)果表明，重組克隆質(zhì)粒中插入目....

圖2.5基于不同PAP蛋白氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹

圖2.5基于不同PAP蛋白氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.2.5PhylogenetictreeofPAPfromdifferentplantspeciesOsWRKY40基因編碼蛋白同源性及其進(jìn)化分析OsWRKY40進(jìn)行保守功能域分析顯示,該蛋白....

本文編號：3892066