目的通過比較研究不同總RNA提取方法,建立一種產毒條件下層出鐮刀菌總RNA提取的方法。方法樣品在低溫液氮高通量組織研磨儀中快速冷凍研磨,分別采用RNA提取試劑盒、Trizol法、CTAB法和改良的Trizol和試劑盒合并法提取其總RNA,并通過微量核酸檢測儀、瓊脂糖凝膠電泳和逆轉錄定量PCR(quantitative reverse transcription PCR, qRT-PCR)對提取的總RNA樣品進行品質檢測。結果試劑盒法不能提取到總RNA;Trizol法和CTAB法均可提取到總RNA,但質量較低,有明顯降解現象;而改良的Trizol法更適合產毒條件下層出鐮刀菌總RNA的提取,此方法可在30min內完成操作,獲得的總RNA質量高,完整性好,條帶清晰均無降解現象。結論該方法快速、方便、高效、通用,提取到的總RNA純度高,濃度和完整性完全滿足后續(xù)層出鐮刀菌全轉錄組測序文庫構建的要求。

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圖2層出鐮刀菌管家基因β-tubulin的qRT-PCR擴增曲線

圖3層出鐮刀菌全轉錄組測序RNA樣品提取檢測報告

圖1不同提取方法對總RNA提取效果的瓊脂糖凝膠電泳檢測

本文編號：3889719