由小麥條銹菌(Puccinia striiformis f.sp.tritic)引起的小麥條銹病是嚴(yán)重危害我國(guó)小麥產(chǎn)量的一類真菌性病害,小麥條銹菌侵染小麥的唯一結(jié)構(gòu)是吸器,病原銹菌通過(guò)吸器從寄主細(xì)胞中獲取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),也通過(guò)吸器向其分泌大量的效應(yīng)蛋白抑制寄主的防御反應(yīng)。目前,對(duì)絕大多數(shù)效應(yīng)蛋白的致病機(jī)理和轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制仍不清楚,又由于絕大多數(shù)的效應(yīng)蛋白從氨基酸序列上都很難找出保守結(jié)構(gòu)域,使得對(duì)銹菌效應(yīng)蛋白的功能研究很難深入。在此背景下,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)生物學(xué)逐漸成為開(kāi)展效應(yīng)蛋白功能深入研究的重要手段。對(duì)小麥條銹菌效應(yīng)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行研究,可以為防止小麥條銹病提供理論依據(jù)。本文中通過(guò)構(gòu)建小麥條銹菌效應(yīng)蛋白的基因pst-2511的原核表達(dá)載體pET-32a-PP-pst-2511,并將其在大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行原核表達(dá),表達(dá)出的蛋白用親和層析法和高效液相色譜法進(jìn)行純化,獲得可溶性的效應(yīng)蛋白。通過(guò)質(zhì)譜鑒定,純化后蛋白質(zhì)的分子量與理論值相符。圓二色譜表征該蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)有α螺旋,且隨著三氟乙醇(TFE)濃度的增加,α螺旋比例增加。TFE濃度為30%時(shí),圓二色譜實(shí)驗(yàn)得出的α-螺旋、β-折疊含量與...

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 小麥條銹菌致病性的研究進(jìn)展
        1.1.1 小麥條銹菌的危害
        1.1.2 小麥條銹菌中吸器的作用
    1.2 病原菌效應(yīng)蛋白的研究概括
    1.3 蛋白質(zhì)純化方法
        1.3.1 親和層析
        1.3.2 離子交換層析
        1.3.3 凝膠過(guò)濾層析
        1.3.4 高效液相色譜
    1.4 蛋白質(zhì)圓二色譜研究進(jìn)展
    1.5 突觸后膜致密物-95的概述
        1.5.1 突觸后膜致密物-95結(jié)構(gòu)
        1.5.2 PSD-95組織突觸后的信號(hào)傳導(dǎo)
        1.5.3 PSD-95調(diào)節(jié)突觸傳遞及動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)突觸PSD-
        1.5.4 PSD-95蛋白的體內(nèi)功能
    1.6 蛋白質(zhì)的棕櫚�；�
        1.6.1 棕櫚酰化的機(jī)制和調(diào)控
        1.6.2 棕櫚酰蛋白質(zhì)組學(xué)
        1.6.3 棕櫚�；暗鞍椎姆�(wěn)定性
        1.6.4 棕櫚�；蛠喖�(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)
    1.7 阿爾茨海默病的研究進(jìn)展
        1.7.1 阿爾茨海默致病機(jī)理
        1.7.2 阿爾茨海默與PSD-95關(guān)系
第二章 表達(dá)載體構(gòu)建及效應(yīng)蛋白pst-2511的表達(dá)與純化
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株和試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法
        2.2.1 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.2 蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.3 蛋白質(zhì)的純化
        2.2.4 Tricine-SDS-PAGE電泳檢測(cè)
        2.2.5 M9培養(yǎng)基的配置
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
        2.3.2 蛋白的表達(dá)與純化
    2.4 小結(jié)
第三章 效應(yīng)蛋白pst-2511的鑒定與二級(jí)結(jié)構(gòu)研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法
        3.2.1 質(zhì)譜分析鑒定效應(yīng)蛋白
        3.2.2 生物信息學(xué)分析
        3.2.3 效應(yīng)蛋白濃度的測(cè)定(BCA法)
        3.2.4 圓二色譜分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 質(zhì)譜分析鑒定效應(yīng)蛋白
        3.3.2 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果
        3.3.3 效應(yīng)蛋白濃度的測(cè)定
        3.3.4 效應(yīng)蛋白圓二色譜結(jié)果
    3.4 小結(jié)
第四章 PSD-95中21肽的棕櫚烷基化修飾研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法
        4.2.1 醋酸緩沖液和還原液的配制
        4.2.2 21肽的還原
        4.2.3 21肽的棕櫚烷基化
        4.2.4 Tricine-SDS-PAGE電泳檢測(cè)
        4.2.5 質(zhì)譜鑒定反應(yīng)產(chǎn)物
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 還原后的21肽在HPLC上的檢測(cè)結(jié)果
        4.3.2 棕櫚烷基化后的21肽在HPLC上的檢測(cè)結(jié)果
        4.3.3 Tricine-SDS-PAGE電泳檢測(cè)結(jié)果
        4.3.4 質(zhì)譜測(cè)定結(jié)果
    4.4 小結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
部分縮略詞
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3882893