黏蟲Mythimna separata(Walker)大范圍發(fā)生時,農(nóng)作物會大大降低產(chǎn)量有時顆粒無收,是全國性的一種重要農(nóng)業(yè)害蟲。目前防治黏蟲的方法主要依靠化學防治,不僅為害非靶標生物的安全,污染環(huán)境,還增強了黏蟲的抗藥性。利用分子生物學技術(shù)是未來最為有效和環(huán)保的生物防治手段之一。幾丁質(zhì)是昆蟲圍食膜的主要成分,它的合成對昆蟲的發(fā)育和變態(tài)起到至關(guān)重要的作用。由于幾丁質(zhì)不存在于植物和脊椎動物中,被認為是理想的環(huán)境友好型農(nóng)藥的設(shè)計靶標。幾丁質(zhì)合成酶B(CHSBs)負責合成中腸圍食膜上的幾丁質(zhì),確保了昆蟲生長發(fā)育中圍食膜的再形成,當抑制CHSBs基因的表達時,圍食膜的結(jié)構(gòu)受到破壞,進而影響蟲體的消化與吸收。因此,對合成黏蟲中腸圍食膜幾丁質(zhì)的幾丁質(zhì)合成酶B進行功能的研究,是發(fā)展生物技術(shù)的方法防治黏蟲的重點。對此,本試驗通過高通量測序法得到黏蟲的幾丁質(zhì)合成酶B基因的cDNA序列。通過生物信息學分析、熒光定量檢測在不同發(fā)育階段和不同組織MsCHSB基因的特異性表達及功能分析,從分子水平上對該基因的表達特性進行研究以及對合成中腸圍食膜幾丁質(zhì)這一功能進行分析。得到的結(jié)果如下:(1)黏蟲幾丁質(zhì)合成酶B基因...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 黏蟲
    1.2 幾丁質(zhì)
        1.2.1 幾丁質(zhì)簡介
        1.2.2 圍食膜幾丁質(zhì)
    1.3 幾丁質(zhì)合成途徑
    1.4 昆蟲幾丁質(zhì)合成酶B研究進展
    1.5 目的與意義
    1.6 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 試驗昆蟲
    2.2 試驗儀器與試劑
    2.3 MsCHSB基因全長cDNA的克隆
    2.4 核苷酸序列的研究
    2.5 氨基酸序列的研究
        2.5.1 氨基酸序列的結(jié)構(gòu)研究
        2.5.2 氨基酸序列的多重比對
        2.5.3 MsCHSB氨基酸序列系統(tǒng)進化樹構(gòu)建
    2.6 MsCHSB基因時空表達研究
        2.6.1 MsCHSB基因不同發(fā)育階段表達研究
        2.6.2 MsCHSB基因不同組織表達研究
    2.7 饑餓對MsCHSB基因表達影響研究
    2.8 20E蛻皮激素對MsCHSB基因表達影響研究
    2.9 有效激素對MsCHSB基因表達影響研究
    2.10 MsCHSB基因的RNA干擾研究
        2.10.1 體外合成dsRNA
        2.10.2 純化dsRNA
        2.10.3 注射dsRNA
3 結(jié)果與分析
    3.1 MsCHSB基因的克隆與分析
    3.2 氨基酸序列分析
        3.2.1 結(jié)構(gòu)域分析
        3.2.2 信號肽預測
        3.2.3 N-糖基化位點預測
        3.2.4 蛋白質(zhì)理化性質(zhì)和跨膜區(qū)域
        3.2.5 預測蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)
        3.2.6 氨基酸序列同源性比對
        3.2.7 氨基酸序列系統(tǒng)進化分析
    3.3 MsCHSB基因時空表達結(jié)果
        3.3.1 MsCHSB基因在不同發(fā)育階段表達結(jié)果
        3.3.2 MsCHSB基因在不同組織表達結(jié)果
    3.4 饑餓處理黏蟲的結(jié)果
        3.4.1 饑餓對MsCHSB基因表達的影響
        3.4.2 饑餓處理后中腸幾丁質(zhì)含量的變化
    3.5 20E蛻皮激素對MsCHSB基因表達的影響
    3.6 有效霉素處理黏蟲的結(jié)果
        3.6.1 有效霉素對MsCHSB基因表達的影響
        3.6.2 有效霉素誘導后中腸幾丁質(zhì)含量的變化
    3.7 RNA干擾黏蟲的結(jié)果
        3.7.1 RNA干擾對MsCHSB基因表達的影響
        3.7.2 RNA干擾后黏蟲的生長發(fā)育
4 討論
    4.1 MsCHSB基因序列分析
    4.2 MsCHSB基因表達特性分析
        4.2.1 MsCHSB基因不同發(fā)育階段表達分析
        4.2.2 MsCHSB基因不同組織表達分析
    4.3 饑餓處理黏蟲的結(jié)果分析
    4.4 20E蛻皮激素對MsCHSB基因表達的影響分析
    4.5 有效霉素處理黏蟲的結(jié)果分析
    4.6 RNA干擾黏蟲的結(jié)果分析
    4.7 展望
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文



本文編號：3840101