發(fā)布時間：2023-08-06 13:36

　　黃瓜綠斑駁花葉病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)屬于帚狀病毒科(Virgaviridae)煙草花葉病毒屬(Tobamovirus)的成員。該病毒系種子傳播,對葫蘆科作物危害較大,在我國尤其是嫁接西瓜易發(fā)生該病毒病害,防治難度較大,已列為我國檢疫性病害。為更好的了解和防御該病毒,本文通過構建該病毒的侵染性克隆,采用定點突變技術對CGMMV各編碼蛋白進行突變,分析突變體產生癥狀以及發(fā)病時間的影響,探明病毒基因組中致病的分子決定簇,以加深人們對該病毒致病分子機理的認識,為防御該病毒病害提供新的思考和路徑。主要研究結果如下:(1)構建了CGMMV的侵染性克隆。由于病毒侵染性克隆構建技術仍是病毒學研究的一個瓶頸,本文除選用CGMMV為研究對象外,也采用了葫蘆科病毒小西葫蘆黃花葉病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)和西瓜花葉病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)作為材料,以便能夠更好地探討病毒侵染性克隆構建的技術。利用傳統的酶切連接方法獲得CGMMV的侵染性克隆p XT1-CGMMV...

【文章頁數】：108 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 黃瓜綠斑駁花葉病毒研究進展
        1.1.1 病原生物學特征及其基因組結構
        1.1.2 寄主范圍及分布情況
        1.1.3 傳播方式
        1.1.4 檢測技術
        1.1.5 病毒侵染性克隆的構建及其應用
        1.1.6 各編碼蛋白對病毒致病性的影響
    1.2 煙草花葉病毒屬研究進展
        1.2.1 基本生物學特性和基因組結構
        1.2.2 分類地位
        1.2.3 病毒種類及分類
        1.2.4 侵染過程及其機制
    1.3 回復突變對病毒致病性的影響
    1.4 本研究的內容和意義
第二章 黃瓜綠斑駁花葉病毒侵染性克隆的構建
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 實驗材料
        2.1.3 菌株和載體
        2.1.4 主要試劑和試劑盒
    2.2 實驗方法
        2.2.1 CGMMV侵染性克隆的構建
        2.2.2 ZYMV和WMV侵染性克隆的構建
        2.2.3 侵染性克隆的接種
        2.2.4 侵染性的檢測
    2.3 結果與分析
        2.3.1 CGMMV侵染性克隆的構建及其侵染性的檢測
        2.3.2 ZYMV和WMV侵染性克隆的構建及其侵染性的檢測
    2.4 討論
    2.5 小結
第三章 CGMMV編碼蛋白氨基酸位點與致病性關系
    3.1 材料與試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 突變體的構建及其侵染性的檢測
        3.2.2 PVX表達系統相關載體的構建及其侵染性的檢測
    3.3 結果與分析
        3.3.1 復制相關蛋白突變分析
        3.3.2 MP突變分析
        3.3.3 CP突變分析
        3.3.4 CP突變體L25A在各自然寄主中所引起的癥狀
        3.3.5 不同區(qū)域在PVX表達系統中的致病性分析
    3.4 討論
    3.5 小結
第四章 復制相關蛋白第284位氨基酸與CGMMV致病性關系初探
    4.1 材料與試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 CGMMV基因組序列的比對
        4.2.2 復制相關蛋白相關突變體的構建及侵染性的檢測
        4.2.3 沉默抑制活性相關檢測
    4.3 結果與分析
        4.3.1 pXT1-CGMMV中所含CGMMV基因組序列的分析
        4.3.2 復制相關蛋白aa284的回復突變及其侵染性分析
        4.3.3 復制相關蛋白aa284相關突變分析
        4.3.4 復制相關蛋白其他精氨酸位點致病性檢測及回復情況分析
        4.3.5 復制相關蛋白Arg284回復機制初探
    4.4 討論
    4.5 小結
第五章 全文結論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷



本文編號：3839510