發(fā)布時(shí)間：2023-07-25 04:03

　　細(xì)菌質(zhì)粒是獨(dú)立于染色體外可自主復(fù)制的遺傳物質(zhì),大多為環(huán)狀雙鏈DNA分子。質(zhì)粒上往往攜帶有抗生素抗性、重金屬抗逆性及功能蛋白分泌系統(tǒng)等功能相關(guān)基因,可幫助宿主菌適應(yīng)生存環(huán)境;而質(zhì)粒的自主復(fù)制與轉(zhuǎn)移能力又使其具備作為基因工程載體的潛力�；蚬こ梯d體在黃單胞菌的致病機(jī)理研究及黃原膠、胞外蛋白酶的合成研究中均有著至關(guān)重要的作用。本研究以水稻條斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzcola,Xoc)為研究對(duì)象,基于水稻條斑病菌中首個(gè)被發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源質(zhì)粒pXOCgx01的序列信息,開展了質(zhì)粒普查分析和基因工程載體的構(gòu)建工作。1.在257株來自全國不同地區(qū)的分離株中共普查得到9種質(zhì)粒,分別命名為 pXOCgx02、pXOCB116、pXOCB209、pXOCB216、pXOCB220、pXOCB409、pXOC709、pXOC820 和 pXOC905。對(duì)普查到的質(zhì)粒進(jìn)行功能鑒定,結(jié)果發(fā)現(xiàn):pXOCB209可能具有重金屬抗逆性、轉(zhuǎn)座基因及IV型分泌系統(tǒng),pXOCgx02和pXOC905可能具有IV型分泌系統(tǒng),pXOCB116、pXOCB216和pXOCB220可能攜帶轉(zhuǎn)座基因,而p...

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 黃單胞菌
        1.1.1 水稻條斑病菌
        1.1.2 水稻條斑病菌分離株Xoc GX01
        1.1.3 水稻條斑病菌致病因子
    1.2 黃單胞菌中質(zhì)粒研究進(jìn)展
        1.2.1 細(xì)菌質(zhì)粒
        1.2.2 黃單胞菌屬細(xì)菌內(nèi)源質(zhì)粒的研究進(jìn)展
        1.2.3 水稻條斑病菌內(nèi)源質(zhì)粒pXOCgx01的發(fā)現(xiàn)
        1.2.4 水稻條斑病菌內(nèi)源質(zhì)粒pXOCgx01上的功能基因
    1.3 質(zhì)粒載體
        1.3.1 質(zhì)粒載體研究進(jìn)展
        1.3.2 質(zhì)粒載體的基本特性
        1.3.3 表達(dá)載體
        1.3.4 實(shí)驗(yàn)室常用質(zhì)粒載體
    1.4 本研究的主要內(nèi)容、目的和意義
        1.4.1 本研究的主要內(nèi)容
        1.4.2 本研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 研究所用菌株
        2.1.2 研究所用質(zhì)粒
        2.1.3 研究所用引物
        2.1.4 研究所用抗生素及配制
        2.1.5 研究所用培養(yǎng)基及配制
        2.1.6 研究所用酶制劑、藥品試劑及耗材
        2.1.7 研究所用試劑及配置方法
        2.1.8 研究所用植株
    2.2 常規(guī)微生物學(xué)操作
        2.2.1 菌株的活化、培養(yǎng)及保存
        2.2.2 生理生化表型檢測(cè)
        2.2.3 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.4 感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 菌株構(gòu)建實(shí)驗(yàn)
    2.3 常規(guī)分子生物學(xué)操作
        2.3.1 細(xì)菌基因組總DNA的提取
        2.3.2 質(zhì)粒DNA的提取
        2.3.3 DNA的純化
        2.3.4 酶切與連接
        2.3.5 PCR
        2.3.6 質(zhì)粒載體末端去磷酸化
        2.3.7 瓊脂糖凝膠電泳
    2.4 Tn5插入與克隆質(zhì)粒拯救
        2.4.1 Tn5插入反應(yīng)
        2.4.2 轉(zhuǎn)化陽性克隆子篩選
        2.4.3 插入位點(diǎn)定位
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 水稻條斑病菌中國分離株內(nèi)源質(zhì)粒分析
        3.1.1 含內(nèi)源質(zhì)粒的Xoc中國分離株普查
        3.1.2 重金屬抗逆性相關(guān)基因的分析
        3.1.3 轉(zhuǎn)座相關(guān)基因的分析
        3.1.4 T4SS相關(guān)基因的分析
        3.1.5 Xoc中國分離株內(nèi)源質(zhì)粒普查與功能基因分析結(jié)果匯總
    3.2 質(zhì)粒載體的構(gòu)建
        3.2.1 pXOCgx01插入Tn5
        3.2.2 獲得重組質(zhì)粒pXTR14k
        3.2.3 初步驗(yàn)證pXTR14k的表達(dá)能力
        3.2.4 構(gòu)建質(zhì)粒載體pXUC2
        3.2.5 質(zhì)粒載體中間體pXUC2表達(dá)能力驗(yàn)證
        3.2.6 替換抗性篩選標(biāo)記,得到最終質(zhì)粒載體pXUG、pXUK
    3.3 穿梭質(zhì)粒載體的應(yīng)用
        3.3.1 穿梭質(zhì)粒載體pXUG在黃單胞菌中的應(yīng)用
        3.3.2 穿梭質(zhì)粒載體pXUK在黃單胞菌中的應(yīng)用
        3.3.3 質(zhì)粒載體穩(wěn)定性驗(yàn)證
第四章 總結(jié)與討論
    4.1 研究總結(jié)
        4.1.1 Xoc中國分離株中內(nèi)源質(zhì)粒的普查
        4.1.2 其它水稻條斑病菌內(nèi)源質(zhì)粒的功能基因
        4.1.3 質(zhì)粒載體的構(gòu)建和功能特點(diǎn)
        4.1.4 質(zhì)粒載體的表達(dá)能力
    4.2 討論與展望
        4.2.1 質(zhì)粒及其功能基因的普查
        4.2.2 質(zhì)粒載體的構(gòu)建
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：3837126