齒蘭環(huán)斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)屬于煙草花葉病毒屬(Tobamovirus),是導(dǎo)致蘭花失去經(jīng)濟(jì)價(jià)值和觀賞價(jià)值的主要病毒之一。近年來(lái),由于國(guó)際市場(chǎng)對(duì)ORSV有較高的檢疫要求,蘭花種苗生產(chǎn)企業(yè)及進(jìn)出口檢疫部門(mén)對(duì)該病毒檢測(cè)產(chǎn)品有較大需求。但是,由于ORSV與同屬病毒存在明顯血清學(xué)交叉反應(yīng),導(dǎo)致使用多克隆抗體的檢測(cè)產(chǎn)品準(zhǔn)確性較差,無(wú)法滿(mǎn)足市場(chǎng)需求。本文為提高檢測(cè)產(chǎn)品的準(zhǔn)確性,首先使用ORSV多克隆抗體(ORSV-PAbs)對(duì)噬菌體展示7肽庫(kù)進(jìn)行淘洗富集;采用高通量測(cè)序技術(shù)測(cè)定噬菌體展示多肽的基因序列,得到4681條序列,其中有58條推導(dǎo)的氨基酸序列與ORSV高度同源,主要分布在1³5_aa、43⁶8_aa、107¹53_aa;同時(shí)結(jié)合位點(diǎn)保守性,初步表明ORSV的特異抗原表位位于:₂SYTITDPSKLAYLSSAWADPNSLINLCTN₃₀、₅₀AD...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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摘要
Abstract
英文縮寫(xiě)詞對(duì)照表
第1章 引言
    1.1 齒蘭環(huán)斑病毒的危害
    1.2 齒蘭環(huán)斑病毒的防治措施
    1.3 齒蘭環(huán)斑病毒的病毒檢測(cè)技術(shù)
    1.4 血清學(xué)檢測(cè)產(chǎn)品的存在問(wèn)題
    1.5 抗原表位應(yīng)用研究概況
    1.6 選題依據(jù)和目的意義
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要儀器與設(shè)備
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 病毒毒源和抗體
        2.1.4 試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 噬菌體展示多肽庫(kù)技術(shù)篩選ORSV抗原表位
        2.2.2 Trx-10 肽融合蛋白原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 Trx-S-30 肽融合蛋白原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.4 表達(dá)載體的測(cè)序與誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.5 多肽融合蛋白和抗體特異性反應(yīng)實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 抗原表位多肽的化學(xué)合成
        2.2.7 抗原表位多肽配基親和介質(zhì)的制備與抗體純化
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 噬菌體展示多肽庫(kù)技術(shù)篩選ORSV抗原表位實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.2 抗原表位驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 Trx-10 肽、Trx-15 肽原核表達(dá)載體的構(gòu)建結(jié)果
        3.2.2 Trx-S-30 肽融合蛋白原核表達(dá)載體的構(gòu)建結(jié)果
        3.2.3 多肽融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.4 多肽融合蛋白與抗體特異性反應(yīng)
    3.3 抗原表位多肽配基親和介質(zhì)的制備與抗體純化實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 抗原表位多肽的合成結(jié)果
        3.3.2 抗原表位多肽配基親和介質(zhì)的制備實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.3 抗原表位抗體的純化實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.4 抗原表位抗體的特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第4章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3836926