【目的】探索棉鈴蟲雙重氧化酶在昆蟲腸道防御機制中的作用�！痉椒ā靠寺∶掴徬xHaDuox編碼區(qū)基因,并利用生物信息學方法分析其編碼的氨基酸序列;構建HaDuox膜外1 117到1 770 bp編碼基因的原核表達載體,轉化大腸桿菌BL21,經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導表達特異性蛋白;采用實時熒光定量PCR技術分析棉鈴蟲幼蟲不同組織和不同發(fā)育時期HaDuox基因的轉錄水平;通過測定基因相對表達量研究棉鈴蟲HaDuox基因對蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis)誘導的免疫響應�！窘Y果】棉鈴蟲HaDuox基因開放閱讀框長4 497 bp,編碼1 498個氨基酸,預測編碼蛋白的相對分子量為171.91 kD。HaDuox與家蠶、橘小實蠅、意大利蜜蜂等昆蟲的雙重氧化酶結構域類似,含有過氧化物酶結構域,鈣離子結合域,鐵還原結構域,黃素腺嘌呤二核苷酸結合域和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸結合域。有7個跨膜區(qū),在第29個和第30個氨基酸位點之間存在一個信號肽切割位點。HaDuox膜外片段在大腸桿菌中成功表達約25 kD的重組蛋白。實時熒光定量PCR結果顯示HaDuox基因在馬氏管和卵期表達...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料和試劑
        1.1.1 供試材料
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方 法
        1.2.1 RNA的提取與cDNA的合成
        1.2.2 棉鈴蟲HaDuox編碼區(qū)基因的克隆
        1.2.3 棉鈴蟲HaDuox基因序列分析
        1.2.4 HaDuox蛋白膜外部分編碼基因的原核表達
        1.2.5 棉鈴蟲HaDuox的表達模式分析
        1.2.6 HaDuox基因的病原誘導表達分析
2 結果與分析
    2.1 棉鈴蟲HaDuox基因的克隆及序列分析
    2.2 棉鈴蟲HaDuox系統(tǒng)發(fā)育分析
    2.3 棉鈴蟲HaDuox蛋白膜外部分編碼基因的原核表達
    2.4 棉鈴蟲HaDuox的表達模式分析
    2.5 棉鈴蟲HaDuox的病原誘導分析
3 討 論



本文編號：3834636