水稻細(xì)菌性褐條病是水稻生產(chǎn)上重要的細(xì)菌性病害之一。該病害在國(guó)內(nèi)外水稻種植地區(qū)普遍發(fā)生,對(duì)水稻的生產(chǎn)安全造成嚴(yán)重影響。本實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)中國(guó)水稻細(xì)菌性褐條病菌的病原鑒定、特征化及致病機(jī)制等開(kāi)展了研究,通過(guò)全基因組序列分析發(fā)現(xiàn)我國(guó)水稻田間分離的Acidovorax avenae subsp.aveae(Aaa)菌株 RS-1 和 RS-2 都存在 Ⅰ 型分泌系統(tǒng)(T1SS)至Ⅵ型分泌系統(tǒng)(T6SS),并對(duì)T6SS開(kāi)展了深入而系統(tǒng)地的研究,揭示了該分泌系統(tǒng)與水稻細(xì)菌性褐條病菌的致病性密切相關(guān)。理解各分泌系統(tǒng)在水稻細(xì)菌性褐條病菌致病中的作用,對(duì)揭示該病害的成災(zāi)機(jī)理非常重要。本研究擬在前期通過(guò)序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)Aaa菌株RS-2中含有9個(gè)Ⅳ型分泌系統(tǒng)(T4SS)基因的基礎(chǔ)上,利用同源重組法構(gòu)建菌株RS-2各個(gè)T4SS基因相應(yīng)的突變體,及4個(gè)致病相關(guān)基因的回補(bǔ)菌株,并比較分析突變體、回補(bǔ)體和野生型在水稻幼苗致病性、游動(dòng)性、生物膜形成、胞外多糖產(chǎn)生、胞外酶活性和過(guò)氧化氫耐受性等致病相關(guān)表型的差異,以鑒定T4SS在水稻細(xì)菌性褐條病菌致病中的功能;本研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn)Acav₀607,Acav ...

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 水稻細(xì)菌性褐條病概況
        1.1.1 發(fā)生與危害
        1.1.2 病原
        1.1.3 病原菌形態(tài)
        1.1.4 病害主要癥狀
        1.1.5 發(fā)病條件
        1.1.6 防治
    1.2 水稻褐條病菌的致病機(jī)制
        1.2.1 致病生化因子
        1.2.2 分泌系統(tǒng)
        1.2.3 噬菌體
2 研究?jī)?nèi)容與目的意義
3 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株與質(zhì)粒
        3.1.2 主要試劑(盒)、酶及抗生素
        3.1.3 培養(yǎng)基及緩沖液、電泳凝膠
    3.2 生物信息學(xué)分析
    3.3 同源重組法
    3.4 突變體的構(gòu)建
        3.4.1 菌株和質(zhì)粒準(zhǔn)備
        3.4.2 引物設(shè)計(jì)
        3.4.3 擴(kuò)增獲得目的基因片段
        3.4.4 酶切和回收目的片段
        3.4.5 目的片段與自殺質(zhì)粒片段連接
        3.4.6 CaCl₂法制備大腸桿菌感受態(tài)及熱擊
        3.4.7 重組質(zhì)粒基因突變菌株的篩選與鑒定
        3.4.8 電擊感受態(tài)的制備與電擊
        3.4.9 基因突變菌株的篩選、鑒定與保存
    3.5 回補(bǔ)體的構(gòu)建
        3.5.1 回補(bǔ)基因的選擇
        3.5.2 菌株和質(zhì)粒準(zhǔn)備
        3.5.3 引物設(shè)計(jì)
        3.5.4 擴(kuò)增和回收獲得回補(bǔ)體目的基因片段
        3.5.5 單酶切pRADK質(zhì)粒
        3.5.6 同源重組質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
        3.5.7 大腸桿菌DH5α感受態(tài)的熱擊轉(zhuǎn)化
        3.5.8 重組質(zhì)�；蛲蛔兙甑暮Y選與鑒定
        3.5.9 電擊感受態(tài)的制備與電擊
        3.5.10 回補(bǔ)體菌株的篩選、鑒定與保存
    3.6 突變體和回補(bǔ)體菌株毒力相關(guān)表型的測(cè)定
        3.6.1 致病性測(cè)定
        3.6.2 生長(zhǎng)曲線測(cè)定
        3.6.3 生物膜形成測(cè)定
        3.6.4 游動(dòng)性測(cè)定
        3.6.5 胞外多糖產(chǎn)生測(cè)定
        3.6.6 胞外酶活性測(cè)定
        3.6.7 過(guò)氧化氫耐受性測(cè)定
        3.6.8 噬菌體侵染能力測(cè)定
        3.6.9 全蛋白提取和質(zhì)譜分析
4 結(jié)果
    4.1 T4SS基因的預(yù)測(cè)
    4.2 T4SS突變體的構(gòu)建
        4.2.1 基因的目的片段的擴(kuò)增
        4.2.2 T4SS基因重組自殺質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.2.3 T4SS基因突變株的篩選和鑒定
    4.3 T4SS回補(bǔ)體的構(gòu)建
        4.3.1 T4SS基因目的片段的擴(kuò)增
        4.3.2 T4SS回補(bǔ)基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.3.3 T4SS基因回補(bǔ)體的篩選和鑒定
    4.4 水稻幼苗致病性
    4.5 生長(zhǎng)曲線
    4.6 生物膜形成
    4.7 游動(dòng)性
    4.8 胞外多糖產(chǎn)生
    4.9 胞外酶活性測(cè)定
        4.9.1 胞外纖維素酶的活性測(cè)定
        4.9.2 胞外淀粉酶的活性測(cè)定
        4.9.3 胞外蛋白酶的活性測(cè)定
    4.10 過(guò)氧化氫耐受性測(cè)定
    4.11 噬菌體侵染能力測(cè)定
    4.12 全蛋白質(zhì)譜分析
        4.12.1 蛋白分類(lèi)
        4.12.2 重要代謝路徑分析
5 討論
    5.1 T4SS突變體和回補(bǔ)體構(gòu)建策略
    5.2 T4SS在病菌致病機(jī)制的作用
    5.3 后續(xù)工作
參考文獻(xiàn)
碩士期間研究成果



本文編號(hào)：3808116