發(fā)布時間：2023-04-25 00:51

　　南方水稻黑條矮縮病毒(Southern rice black streaked dwarf virus,SRBSDV)是呼腸孤病毒科Reoviridae斐濟病毒屬Fijivirus的一個新種,由白背飛虱持久性傳播。2009-2014年,該病毒在我國南方稻區(qū)和東南亞水稻主產(chǎn)區(qū)爆發(fā)危害,嚴重影響水稻生產(chǎn)。此后,我國采用全國性“聯(lián)防聯(lián)控”措施,將該病毒田間發(fā)生率控制到5%以下。然而,近年來,該病毒的發(fā)生率有逐步上升的趨勢。南方水稻黑條矮縮病毒的致病性、傳播途徑、編碼的基因功能都有相關報道,但是,該病毒的致病分子機制仍需進一步深入研究,研究結(jié)論將有助于分析和揭示該病毒的爆發(fā)機制。本研究從湖南省不同地區(qū)采集了水稻樣本,南方水稻黑條矮縮病毒檢測結(jié)果表明,2015-2017年,在湖南省有南方水稻黑條矮縮病毒發(fā)生危害。前期研究中,利用南方水稻黑條矮縮病毒編碼的Pns 71蛋白為誘餌,篩選到與其互作的水稻蛋白Cyns,并采用細胞共定位和雙分子熒光互作證實二者真實互作。為進一步深入研究Pns 71蛋白與Cyns蛋白的互作機制,分析Cyns蛋白的保守結(jié)構域,顯示其含有RNA-binding superfam...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 南方水稻黑條矮縮病毒的研究進展
        1.1.1 南方水稻黑條矮縮病毒的發(fā)生及危害
        1.1.2 分類地位和粒體形態(tài)
        1.1.3 基因組結(jié)構和功能
        1.1.4 SRBSDV寄主及傳播介體
        1.1.5 介體的傳毒機制
        1.1.6 SRBSDV與寄主和傳毒介體的互作研究
    1.2 Cyns基因的研究進展
    1.3 本研究中用到的關鍵技術體系
        1.3.1 酵母雙雜交技術
        1.3.2 病毒誘導的基因沉默體系
            1.3.2.1 病毒誘導的基因沉默簡介
            1.3.2.2 病毒誘導的基因沉默體系的建立與發(fā)展
            1.3.2.3 VIGS的作用機制
            1.3.2.4 VIGS優(yōu)缺點
            1.3.2.5 煙草脆裂病毒載體
        1.3.3 實時熒光定量PCR技術
            1.3.3.1 實時熒光定量PCR的簡介
            1.3.3.2 實時熒光定量PCR的應用
            1.3.3.3 實時熒光定量PCR的優(yōu)缺點
    1.4 本章小結(jié)
第二章 南方水稻黑條矮縮病毒田間發(fā)生情況分子檢測
    2.1 材料
    2.2 方法
        2.2.1 水稻總RNA的提取
        2.2.2 水稻總cDNA的合成
        2.2.3 SRBSDV的PCR擴增
        2.2.4 SRBSDV的PCR產(chǎn)物回收
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 水稻樣品采集
        2.3.2 SRBSDV檢測
    2.4 本章小結(jié)
第三章 SRBSDVPns71蛋白與水稻Cyns蛋白互作的關鍵結(jié)構域
    3.1 材料
    3.2 方法
        3.2.1 感受態(tài)細胞的制備
        3.2.2 Cyns基因結(jié)構域分析及結(jié)構域克隆PCR引物設計
        3.2.3 酵母表達載體的構建
        3.2.4 兩質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細胞
        3.2.5 蛋白互作的檢測
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 Cyns基因結(jié)構域分析及克隆
        3.3.2 Cyns基因結(jié)構域PCR擴增
        3.3.3 Cyns基因結(jié)構域克隆
        3.3.4 酵母表達載體的構建
        3.3.5 與Pns71互作的Cyns蛋白關鍵結(jié)構域
    3.4 本章小結(jié)
第四章 水稻Cyns基因的功能
    4.1 材料
    4.2 方法
        4.2.1 感受態(tài)細胞的的配置
        4.2.2 Cyns基因沉默病毒載體的引物設計
        4.2.3 本氏煙總RNA的提取與cDNA的合成
        4.2.4 TRV-VIGS系統(tǒng)的構建
        4.2.5 TRV-VIGS重組載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        4.2.6 TRV-VIGS體系侵染水稻和本氏煙
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 目的基因的PCR擴增
        4.3.2 目的基因克隆
        4.3.3 TRV-VIGS系統(tǒng)的構建
        4.3.4 沉默Cyns基因水稻表型
        4.3.5 沉默Cyns基因本氏煙表型
        4.3.6 Cyns在本氏煙的相對表達量
    4.4 本章小結(jié)
全文結(jié)論
參考文獻
論文致謝
附錄 A-攻讀學位期間發(fā)表論文
附錄 B



本文編號：3800371