蛻皮激素(MH)是蛻皮酮及其類似物的總稱,類固醇激素羥基蛻皮酮(20E)是其主要活性形式。蛻皮激素在調(diào)控昆蟲(chóng)變態(tài)過(guò)程中發(fā)揮著核心作用,昆蟲(chóng)依靠體內(nèi)蛻皮激素滴度變化,調(diào)控整個(gè)變態(tài)發(fā)育歷程。本課題通過(guò)對(duì)蛻皮激素受體(EcR)與超氣門蛋白(USP)基因在西方蜜蜂三型蜂的不同發(fā)育歷期的表達(dá)規(guī)律進(jìn)行研究,同時(shí),我們利用RNA干擾技術(shù)進(jìn)一步的對(duì)EcR與USP基因的表達(dá)機(jī)制進(jìn)行分析。具體結(jié)果如下:為探究蛻皮激素早期應(yīng)答因子ecr和usp在不同級(jí)型的西方蜜蜂體內(nèi)的時(shí)空表達(dá)情況及其他相關(guān)生物學(xué)功能和作用,本研究通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)不同級(jí)型、發(fā)育時(shí)期的西方蜜蜂中的ecr與usp表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,ecr、usp在工蜂小幼蟲(chóng)體內(nèi)的表達(dá)與參照相同,隨后稍有增加,但在變態(tài)期急劇降至最低水平,而后的蛹期又逐步增加,在成年蜂時(shí)期的表達(dá)持續(xù)維持在較高水平;蜂王體內(nèi)的變化趨勢(shì)與工蜂基本類似,所不同的是各階段的表達(dá)量都顯著高于工蜂,且在產(chǎn)卵王體內(nèi)的表達(dá)顯著高于處女蜂王;雄蜂體內(nèi)ecr的表達(dá)在小幼蟲(chóng)時(shí)期稍高,但此后至蛹期都一直處于較低的表達(dá)水平,至蛹后期才稍有增加,但羽化后水平較低,老齡雄蜂體內(nèi)又稍有提高。但u...

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 蛻皮激素
        1.1 蛻皮激素的種類及功能
        1.2 蛻皮激素在蜜蜂體內(nèi)的周期性變化
        1.3 蛻皮激素的合成與代謝
    2 蛻皮激素受體與超氣門蛋白
        2.1 EcR與USP的結(jié)構(gòu)特征
        2.2 EcR/USP復(fù)合體與蛻皮激素信號(hào)的傳導(dǎo)
        2.3 EcR與USP在變態(tài)發(fā)育中的作用
        2.4 EcR與USP的研究前景與意義
    3 熒光定量
        3.1 熒光定量的原理與應(yīng)用
        3.2 熒光定量方法
    4 基因干擾技術(shù)及其在蜜蜂RNAi中的應(yīng)用
        4.1 基因干擾技術(shù)的原理與應(yīng)用
        4.2 試劑盒合成dsRNA介導(dǎo)RNAi
    5 本論文擬解決的問(wèn)題
第二章 西方蜜蜂體內(nèi)EcR與USP基因的表達(dá)
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 供體蜜蜂品種及采樣標(biāo)準(zhǔn)
            1.1.2 試劑
            1.1.3 主要儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 提取RNA與cDNA反轉(zhuǎn)錄
            1.2.2 ecr、usp克隆與定量引物驗(yàn)證
            1.2.3 熒光定量PCR
            1.2.4 數(shù)據(jù)分析
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.1 ecr、usp定量引物驗(yàn)證
        2.2 定量引物特異性檢驗(yàn)
        2.3 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.4 ecr在西方蜜蜂體內(nèi)各時(shí)期的表達(dá)
        2.5 ecr在3種級(jí)型之間的表達(dá)差異
        2.6 usp在西方蜜蜂體內(nèi)各時(shí)期的表達(dá)
        2.7 usp在3種級(jí)型之間的表達(dá)差異
    3 討論
第三章 利用試劑盒合成dsRNA干擾西方蜜蜂ecr的研究
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 供體蜜蜂品種及采樣標(biāo)準(zhǔn)
            1.1.2 試劑
            1.1.3 主要儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 提取RNA與cDNA反轉(zhuǎn)錄
            1.2.2 ecri克隆與引物驗(yàn)證
            1.2.3 試劑盒合成dsRNA
            1.2.4 純化ecr的dsRNA
            1.2.5 試劑盒合成并純化egfp dsRNA
            1.2.5 ecr dsRNA注射工蜂幼蟲(chóng)干擾試驗(yàn)
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.1 ecr的PCR擴(kuò)增、質(zhì)粒重組及基因克隆
        2.2 ecr和egfp dsRNA的合成
        2.3 dsRNA注射干擾結(jié)果
    3 討論
第四章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3796099