發(fā)布時(shí)間：2023-04-19 20:02

　　萊氏野村菌(Nomuraea rileyi=Metarhizium rileyi)是全世界廣泛分布的環(huán)境友好型生物防治真菌,主要侵染夜蛾科的害蟲(chóng)。其分生孢子是真菌殺蟲(chóng)劑的有效成分,但分生孢子在常規(guī)的真菌培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量低、且需要光照等因素限制了該菌的規(guī)�；a(chǎn)和商業(yè)化應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)液體發(fā)酵成功誘導(dǎo)出萊氏野村菌微菌核(王中康,2012,ZL2011103033145),微菌核(microsclerotium,MS)是在特定條件下由菌絲的大量聚集纏繞特化形成的一種休眠繁殖體結(jié)構(gòu),其作為害蟲(chóng)生防接種體,萌發(fā)生長(zhǎng)過(guò)程快、抗逆性強(qiáng)、貨架期長(zhǎng)、穩(wěn)定性高等優(yōu)良特性,為新的萊氏野村菌殺蟲(chóng)制劑的創(chuàng)制提供了全新的來(lái)源。前期實(shí)驗(yàn)室工作已經(jīng)證實(shí),微菌核的形成是一種氧化脅迫的過(guò)程,微菌核的形成伴隨著色素的沉淀、活性氧(ROS)的大量產(chǎn)生以及大量氧化脅迫相關(guān)基因的上調(diào)表達(dá),對(duì)這一調(diào)控通路的研究可為開(kāi)發(fā)高毒力的萊氏野村菌生防制劑提供重要的理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)從已建立的N.rileyi轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)中篩選出與微菌核誘導(dǎo)形成相關(guān)的兩個(gè)上調(diào)表達(dá)的Cu/Zn-sod基因,分別命名為Nrsod1和Nrsod2,并通過(guò)基因敲除的方法...

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
縮略詞
1 緒論
    1.1 引言
    1.2 研究背景
        1.2.1 萊氏野村菌概況
        1.2.2 微菌核研究進(jìn)展
        1.2.3 生防真菌抗逆生物學(xué)
        1.2.4 sod基因的研究進(jìn)展
    1.3 研究目的
    1.4 研究?jī)?nèi)容
    1.5 技術(shù)路線
    1.6 本研究的創(chuàng)新之處
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株和載體
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 研究方法
        2.2.1 菌種活化與孢懸液的制備
        2.2.2 微菌核的誘導(dǎo)培養(yǎng)
        2.2.3 萊氏野村菌基因組DNA的提取
        2.2.4 萊氏野村菌RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.2.5 Nrsod1和Nrsod2基因的克隆
        2.2.6 Nrsod1和Nrsod2左右臂序列的擴(kuò)增
        2.2.7 Nrsod1和Nrsod2基因生物信息學(xué)分析
        2.2.8 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備與轉(zhuǎn)化
        2.2.9 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備與轉(zhuǎn)化
        2.2.10 Nrsod1和Nrsod2基因敲除載體構(gòu)建
        2.2.11 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的萊氏野村菌遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.12 突變體初步篩選
        2.2.13 敲除突變株表型分析
        2.2.14 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.15 毒力測(cè)定
        2.2.16 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及顯著性分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 Nrsod1和Nrsod2基因克隆與分析
        3.1.1 Nrsod1和Nrsod2基因克隆
        3.1.2 Nrsod1和Nrsod2基因生物信息學(xué)分析
        3.1.3 同源比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化分析
    3.2 敲除載體構(gòu)建與突變菌株篩選驗(yàn)證
        3.2.1 敲除載體構(gòu)建
        3.2.2 突變菌株篩選驗(yàn)證
    3.3 基因敲除對(duì)萊氏野村菌性狀及功能的影響
        3.3.1 萊氏野村菌在培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)發(fā)育基本情況分析
        3.3.2 脅迫條件下菌株表型分析
        3.3.3 △Nrsod1和△Nrsod2基因?qū)ξ⒕诵纬傻挠绊?br>        3.3.4 Nrsod1和Nrsod2基因表達(dá)模式分析
    3.4 Nrsod1和Nrsod2基因?qū)Χ玖Φ挠绊懛治?br>4 討論
5 主要結(jié)論與后續(xù)工作
    5.1 主要研究結(jié)論
    5.2 后續(xù)工作建議
致謝
附件
參考文獻(xiàn)
附錄
    A. 作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文目錄
    B. 作者在攻讀碩士學(xué)位期間參與科研項(xiàng)目



本文編號(hào)：3794126