樗蠶(Philosamia cynthia cynthia)又名椿蠶、小桕蠶等,屬于鱗翅目大蠶蛾科、樗蠶蛾屬的一個物種。樗蠶以蓖麻、烏桕、臭椿(樗)等作為食物,雜食性強、繁殖力強,是園林植物的重要害蟲;樗蠶也是泌絲營繭的資源昆蟲,繭可用于制絲,蠶蛹可以作為食品或飼料,是重要的經(jīng)濟昆蟲。孵化酶(Hatching enzyme,HE)是由胚胎孵化腺細胞分泌的一種蛋白酶,通過降解卵膜/卵殼,使幼蟲孵化,進而進行后期的生長發(fā)育。本文根據(jù)已報道鱗翅目昆蟲孵化酶的基因保守序列,用RACE-PCR技術(shù)獲得樗蠶孵化酶全長序列,對樗蠶孵化酶進行時空表達模式分析、組織表達模式分析、原核表達分析。本文主要獲得如下研究結(jié)果:(1)利用RACE-PCR和RT-PCR首次獲得樗蠶孵化酶的全長cDNA。樗蠶孵化酶基因由5’非翻譯區(qū)、3’非翻譯區(qū)和885 bp的開放閱讀框組成,全長964 bp,且3’UTR含有一個多聚腺苷酸AATAAA信號。同源序列比對結(jié)果表明,樗蠶與蓖麻蠶、野蠶、柞蠶、家蠶、桑蟥、小菜蛾、果蠅和蚊子等昆蟲聚類,其中,樗蠶孵化酶與蓖麻蠶孵化酶之間的親緣關(guān)系最近。(2)用軟件對PccHE蛋白的三級結(jié)構(gòu)...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 概述
    1.2 動物孵化酶研究進展
        1.2.1 蝦紅素蛋白酶家族
        1.2.2 魚類孵化酶的研究進展
        1.2.3 哺乳動物孵化酶的研究進展
        1.2.4 昆蟲孵化酶的研究進展
        1.2.5 其他動物孵化酶的研究進展
    1.3 部分野蠶基因克隆研究進展
        1.3.1 野桑蠶
        1.3.2 柞蠶
        1.3.3 蓖麻蠶
        1.3.4 柳蠶
        1.3.5 其他野蠶
    1.4 本課題的研究目的與意義
    1.5 本文主要研究內(nèi)容及關(guān)鍵技術(shù)
        1.5.1 主要內(nèi)容
        1.5.2 關(guān)鍵技術(shù)
        1.5.3 技術(shù)路線
第二章 樗蠶孵化酶基因全長cDNA的克隆與時空表達分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 宿主菌、載體、酶
        2.1.2 主要實驗儀器和設(shè)備
        2.1.3 常用試劑和緩沖液
        2.1.4 PccHE部分序列的基因克隆
        2.1.5 引物設(shè)計
        2.1.6 總RNA提取
        2.1.7 PccHE第一鏈cDNA合成
        2.1.8 PccHE部分片段的克隆
        2.1.9 膠回收試劑盒回收DNA
        2.1.10 目的片段與pMD18-T載體的連接
        2.1.11 感受態(tài)細胞制備
        2.1.12 轉(zhuǎn)化
        2.1.13 堿裂解法少量提取質(zhì)粒DNA
        2.1.14 甘油菌的制備及序列測定
        2.1.15 3'RACE擴增PccHE基因3'端序列
        2.1.16 Clontech 5'RACE擴增PccHE 5'端序列
        2.1.17 PccHE表達模式分析
        2.1.18 生物信息學分析
        2.1.19 PccHE ORF序列的克隆
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 樗蠶孵化酶基因PccHEc DNA部分序列的克隆
        2.2.2 PccHE全長的克隆
        2.2.3 同源比對及進化分析
        2.2.4 樗蠶孵化酶三級結(jié)構(gòu)
        2.2.5 卵催青期胚胎發(fā)育不同階段PccHE轉(zhuǎn)錄水平的變化
        2.2.6 幼蟲期PccHE組織表達譜
    2.3 討論
    2.4 本章小結(jié)
第三章 PccHE的原核表達分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 去信號肽序列與成熟酶序列對應(yīng)核苷酸序列的克隆
        3.1.3 原核表達重組載體的構(gòu)建
        3.1.4 PccHE蛋白的原核表達
        3.1.5 SDS-PAGE電泳
        3.1.6 Western Blot
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 原核表達重組載體的構(gòu)建
        3.2.2 重組載體的原核表達
    3.3 討論
    3.4 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文
致謝



本文編號：3788658