發(fā)布時間：2023-04-09 18:17

　　植物病原線蟲每年給農(nóng)業(yè)造成的損失十分嚴(yán)重,生防真菌是重要的線蟲生防資源。但是土壤抑菌作用使生防真菌的孢子很難在土壤中萌發(fā)生長繁殖,在實際的應(yīng)用中存在著防效低和不穩(wěn)定的問題。為了研究土壤抑菌作用抑制真菌孢子萌發(fā)的分子機(jī)制,首先,本論文以捕食線蟲真菌Arthrobotrys oligospora為研究對象,通過iTRAQ-LC-MS/MS蛋白組學(xué)技術(shù)測定了被土壤懸液抑制萌發(fā)的孢子的蛋白組,在蛋白組層面分析土壤抑制寡孢孢子萌發(fā)的分子機(jī)制。其次,在實驗室前期研究已經(jīng)做的土壤抑菌物質(zhì)苯甲醛和氨氣分別抑制寡孢節(jié)叢孢分生孢子萌發(fā)的蛋白組數(shù)據(jù)中,我們篩選出了 6個重要的與孢子萌發(fā)相關(guān)的蛋白編碼基因(AOL_s00169g229、AOL-s00215g160、AOL-s00075g181、AOL-s00083g51、AOL_s00075g106、AOL_s00215g7)利用同源重組的方法進(jìn)行了敲除。之后對敲除株的生長速率、產(chǎn)孢情況、孢子萌發(fā)率以及抗逆性進(jìn)行了研究。本研究為最終揭示土壤抑制寡孢節(jié)叢孢孢子萌發(fā)的分子機(jī)理進(jìn)行了一些有益的探索。主要研...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 植物病原線蟲的危害和防治
        1.1 植物病原線蟲的危害
        1.2 線蟲的生物防治
    2 土壤抑菌作用的研究
        2.1 土壤抑菌作用的普遍性
        2.2 土壤抑真菌作用機(jī)理的兩種假說
        2.3 土壤抑菌機(jī)理的研究
    3 真菌分生孢子萌發(fā)的分子機(jī)制研究進(jìn)展
        3.1 cAMP信號途徑參與真菌孢子萌發(fā)過程研究
        3.2 Ca²⁺信號在孢子萌發(fā)過程中的研究
        3.3 Ras/MAPK信號途徑在孢子萌發(fā)過程中的研究
        3.4 蛋白質(zhì)合成與孢子萌發(fā)
    4 本論文的選題依據(jù)和研究意義
第二章 土壤抑制寡孢節(jié)叢孢孢子萌發(fā)的蛋白組研究
    1 前言
    2 實驗材料和實驗方法
        2.1 實驗材料和設(shè)備
        2.2 實驗方法
    3 實驗結(jié)果
        3.1 土壤對寡孢節(jié)叢孢孢子萌發(fā)的抑制
        3.2 孢子蛋白關(guān)聯(lián)樣本的檢測
        3.3 蛋白樣本的測序以及差異蛋白篩選
    4 分析和討論
第三章 寡孢節(jié)叢孢孢子萌發(fā)相關(guān)基因的敲除
    1 前言
    2 實驗材料及儀器
        2.1 實驗菌株和載體
        2.2 實驗用溶液及培養(yǎng)基
        2.3 實驗試劑
        2.4 實驗儀器和設(shè)備
    3 研究方法和步驟
        3.1 基因編號
        3.2 構(gòu)建敲除載體
        3.3 原生質(zhì)體的制備及其轉(zhuǎn)化
        3.4 轉(zhuǎn)化子基因組提取
        3.5 轉(zhuǎn)化子PCR驗證
    4 實驗結(jié)果與分析
        4.1 目的片段擴(kuò)增,潮霉素基因擴(kuò)增及酶切pRS426質(zhì)粒檢測
        4.2 敲除載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌轉(zhuǎn)化子的驗證
        4.3 敲除全長片段擴(kuò)增
        4.4 寡孢節(jié)叢孢敲除轉(zhuǎn)化子PCR驗證
    5 討論
        5.1 敲除載體的構(gòu)建及原生質(zhì)體制備轉(zhuǎn)化
        5.2 轉(zhuǎn)化子的篩選驗證
    6 小結(jié)
第四章 寡孢節(jié)叢孢野生型與敲除型的菌株表型特征比較和分析
    1 前言
    2 實驗材料
        2.1 實驗菌株
    3 實驗方法
        3.1 菌絲的生長速率和形態(tài)觀察
        3.2 產(chǎn)孢子數(shù)量比較
        3.3 孢子萌發(fā)率比較
        3.4 苯甲醛對229敲除株孢子萌發(fā)的影響
    4 實驗結(jié)果
        4.1 生長速率的比較
        4.2 產(chǎn)孢量的比較
        4.3 孢子萌發(fā)率的比較
    5 討論
        5.1 敲除株與野生型菌株生長速率的比較
        5.2 產(chǎn)孢情況比較
        5.3 孢子萌發(fā)率比較
全文小結(jié)及展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號：3787502