小麥赤霉病(Fusarium head blight)是一種普遍存在于全球溫暖潮濕地區(qū)的真菌病害,它嚴(yán)重威脅著小麥等禾谷類作物的產(chǎn)量與品質(zhì)。引起小麥赤霉病的主要病原菌是小麥赤霉菌(Fusarium graminearum),由該真菌產(chǎn)生的多種次級代謝產(chǎn)物對作物和人畜都有巨大的危害。因此,通過分子生物學(xué)的手段從根本上探索小麥赤霉病相關(guān)基因的致病機理至關(guān)重要。小麥赤霉菌MAPK信號通路上的MGV1敲除突變體轉(zhuǎn)錄組測序表明,與野生型小麥赤霉菌菌株P(guān)H-1相比,缺失MGV1基因后共有3791個基因表達(dá)發(fā)生變化,其中有1729個上調(diào)基因,2062個下調(diào)基因�；虿町惐磉_(dá)分析發(fā)現(xiàn),FGSG₀9297基因在MGV1基因存在時,表達(dá)量為0;當(dāng)MGV1基因缺失后,該基因表達(dá)量顯著上調(diào)。GO注釋推測該基因存在于細(xì)胞內(nèi)膜上,在生物學(xué)過程中與氨基酸的跨膜運輸有關(guān),在分子功能上具有氨基酸跨膜轉(zhuǎn)運蛋白的活性。由此猜想FGSG₀9297基因與MGV1基因有一定關(guān)聯(lián),所以選擇該基因作為研究對象,通過基因取代技術(shù)對其進(jìn)行功能研究。本研究利用Split-Marker基因敲除技術(shù)...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
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1 引言
    1.1 小麥赤霉病簡介
    1.2 小麥赤霉病的防治
    1.3 小麥赤霉菌簡介
    1.4 小麥赤霉菌次級代謝產(chǎn)物的危害
    1.5 小麥赤霉菌研究進(jìn)展
    1.6 FGSG₀9297 基因研究背景
    1.7 本研究的目的和意義
2 小麥赤霉菌FGSG₀9297 基因敲除盒的構(gòu)建
    2.1 試驗材料、試劑和儀器
        2.1.1 材料
        2.1.2 主要試劑及培養(yǎng)基配方
        2.1.3 試驗器材
    2.2 試驗方法及步驟
        2.2.1 野生型小麥赤霉菌菌株P(guān)H-1 基因組DNA的提取
        2.2.2 質(zhì)粒pCB1003 DNA的提取
        2.2.3 FGSG₀9297 基因敲除盒的構(gòu)建
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 野生型小麥赤霉菌PH-1 基因組DNA的提取
        2.3.2 pCB1003質(zhì)粒DNA的提取
        2.3.3 FGSG₀9297 基因上下游序列的PCR擴(kuò)增
        2.3.4 hph基因上下游序列的PCR擴(kuò)增
        2.3.5 Split-Marker重疊序列的PCR擴(kuò)增
    2.4 討論
3 小麥赤霉菌FGSG₀9297 基因的敲除及轉(zhuǎn)化子的篩選鑒定
    3.1 試驗材料、試劑和儀器
        3.1.1 材料
        3.1.2 主要試劑及培養(yǎng)基配方
        3.1.3 試驗器材
    3.2 試驗方法及步驟
        3.2.1 原生質(zhì)體的制備與轉(zhuǎn)化
        3.2.2 轉(zhuǎn)化子的篩選及鑒定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 轉(zhuǎn)化子的初篩
        3.3.2 轉(zhuǎn)化子DNA的提取
        3.3.3 轉(zhuǎn)化子的PCR正負(fù)篩選
    3.4 討論
4 小麥赤霉菌FGSG₀9297 基因敲除突變體的表型分析及致病力檢測
    4.1 試驗材料、試劑和儀器
        4.1.1 材料
        4.1.2 主要試劑及培養(yǎng)基配方
        4.1.3 試驗器材
    4.2 實驗方法
        4.2.1 菌落形態(tài)的觀察
        4.2.2 菌落生長速度的測定
        4.2.3 分生孢子形態(tài)觀察
        4.2.4 產(chǎn)孢量的測定
        4.2.5 原生質(zhì)體釋放實驗
        4.2.6 菌株對溫度敏感性測定
        4.2.7 番茄侵染試驗
        4.2.8 菌株培養(yǎng)液顏色觀察
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 菌落形態(tài)
        4.3.2 菌落生長速度
        4.3.3 分生孢子形態(tài)觀察
        4.3.4 產(chǎn)孢量
        4.3.5 原生質(zhì)體釋放情況
        4.3.6 菌株對溫度敏感性
        4.3.7 番茄侵染
        4.3.8 菌液顏色
    4.4 討論
5 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄 1
附錄 2
附錄 3
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：3769000