近年來的研究發(fā)現(xiàn)在昆蟲體內(nèi)含有一類ds RNA核酸內(nèi)切酶(ds RNase),能夠通過降解雙鏈RNA(ds RNA)降低昆蟲的RNAi效率。本論文利用小菜蛾全基因組數(shù)據(jù)庫,篩選鑒定小菜蛾的ds RNase,通過體內(nèi)與體外實驗研究其對小菜蛾RNAi效率的影響。主要研究結(jié)果如下:依據(jù)部分鱗翅目昆蟲ds RNase蛋白序列在小菜蛾基因組數(shù)據(jù)庫中篩選出4個目的基因(Pxds RNase1、Pxds RNase2、Pxds RNase3和Pxds RNase4)。且Pxds RNase1、Pxds RNase2和Pxds RNase3編碼的蛋白含有信號肽和Endounuclease NS域,而基因Pxds RNase4編碼的蛋白僅含有Endounuclease NS域。通過進化樹分析發(fā)現(xiàn),Pxds RNase1、Pxds RNase2和Pxds RNase3與其他鱗翅目昆蟲ds RNase的同源性最高,而Pxds RNase4與雙翅目昆蟲ds RNase同源性最高。表達模式分析發(fā)現(xiàn),這4個基因都在小菜蛾4齡幼蟲期表達量最高,其中Pxds RNase1和Pxds RNase4在各個齡期都有表達,而...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 非特異性核酸內(nèi)切酶
    1.2 ds RNase的研究進展
    1.3 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 供試昆蟲
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 供試菌種和質(zhì)粒
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小菜蛾血淋巴和中腸蛋白降解 ds RNA 的測定
        2.2.2 基因的篩選
        2.2.3 生物信息學分析
        2.2.4 小菜蛾總 RNA 的提取
        2.2.5 c DNA 的合成
        2.2.6 引物設(shè)計
        2.2.7 Pxds RNase 序列的克隆
        2.2.8 RT - q PCR 檢測表達量
        2.2.9 ds RNA 的合成
        2.2.10 注射和喂飼 dsRNA
        2.2.11 Pxds RNase的原核表達
        2.2.12 Pxds RNase重組蛋白降解ds RNA能力的測定
        2.2.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 中腸和血淋巴總蛋白對dsRNA的降解
    3.2 小菜蛾ds RNase的序列特征
    3.3 Pxds RNase的時空表達模式
    3.4 注射ds Pxds RNase對 RNAi效率的影響
    3.5 喂飼ds Pxds RNase對 RNAi效率的影響
    3.6 PxdsRNase 的體外功能驗證
        3.6.1 Pxds RNase的原核表達
        3.6.2 Pxds RNase降解ds RNA的能力
4 討論
    4.1 昆蟲ds RNase的保守性
    4.2 昆蟲ds RNase的表達模式與組織孵育
    4.3 昆蟲ds RNase對 RNAi效率的影響
        4.3.1 昆蟲ds RNase對體內(nèi)ds RNA的降解
        4.3.2 昆蟲ds RNase對體外ds RNA的降解
5 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 展望
參考文獻
致謝
附錄



本文編號：3764735